ESI-MS应用于三氯氧磷与氨基酸及四氢呋喃反应的研讨.pdf

摘要 摘要 在自然界中存在不同形态的蛋白质和活性多肽，它们具有不同的生物 功能。这些种类繁多的蛋白质和多肽，从化学结构上看，都是由氨基酸残 基通过酰胺键(肽键)连接而成的。多肽的合成从20世纪初Fisher的工作 开始。随着各种经典方法的建立，在五十年代出现了高潮。近几十年来， 相继发现了许多有生理活性的小肽，存在于垂体、下丘脑、消化道、各种 腺体甚至神经系统、循环系统中。但它们的天然含量极少，因此研究肽的 合成方法是一项重要的课题。 形成肽键的基本方法，可以活化氨基也可以活化羧基，但是迄今为止 普遍使用的都是活化羧基的方法。五十年代广泛使用的肽键合成方法为混 合酸酐法，活泼酯法和碳二亚胺(DCC)缩合试剂法等。目前常用的主要 有液相合成法、固相合成法和酶促法。有机磷试剂作为一类肽缩合试剂已 被认识并在多肽合成中得到应用，并且有一些有机磷缩合剂在肽合成中表 现出优异的性能。赵玉芬教授领导的生命有机磷研究小组多年的研究结果 (如O，O．亚苯基磷酰氯)反应生成N一磷酰-洳氨基酸后，可以发生自组装 反应，得到七肽或八肽自组装产物。此外，在磷酰基活化下，氨基酸也能 通过自组装反应形成多肽。 迄今为止，已经发展了很多切断醚C．O键的方法，其中最具有吸引力 的方法是酰基化切断C．O键的方法，因为这种方法可以产生一些很有用的 酯，还有就是各种各样的路易斯酸(比如TiCl4和zncl2)和低化合价态的 金属络合物(比如Mo(CO)6)均可用作此法的催化剂。本文研究发现，三 氯氧磷不但可以使四氢呋喃开环寡聚，还可以使THF开环并与羧酸反应生 成4．氯丁基酯。从实际应用来考虑，THF／POCl3摩尔比为2，反应13小时 可以产生55％双4．氯丁基醚，此反应条件具有潜在的实际应用价值。 摘要 我们实验室已经系统地研究了以1，4．二氧六环为溶剂各种氨基酸在 POCl3辅助下的成肽反应，在室温和较长反应时间的条件下，非极性氨基 酸均能有效地成肽而构建肽库。本论文以THF为溶剂，将氨基酸与POCl3 加热回流反应，得到了新的结果。对甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、缬氨酸(v)、 亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)和苯丙氨酸(F)六种氨基酸与三氯氧磷在四 氢呋喃中加热回流反应进行了研究，发现了氨基酸能够较快地形成二肽、 三肽、四肽等寡肽的肽库，而四氢呋喃可以开环并与氨基酸或肽生成相应 的酯。产物的结构通过ESI多级串联质谱确定为二肽、三肽、四肽等寡肽 的肽．4一氯丁基酯库。从肽一4．氯丁基酯的质谱裂解方式，发现它们按照相同 的质谱裂解规律发生断裂，相同的裂解途径都会产生相似的离子，例如从 N端发生断裂，失去一系列的氨基酸残基；从C端发生断裂，先失去4．氯 丁基醇，然后再失去氨基酸残基， 本论文研究了三氯氧磷作用下氨基酸成肽及四氢呋喃开环并与其成酯 的反应机理。充分利用ESI．MS、31P—NMR以及13C．NMR等技术手段，跟 踪了反应进程，提出了氨基酸成肽和瞪氢呋喃开环成酯的反应机理。对DL一 丙氢酸、L．丙氨酸及D一丙氨酸与POCl3反应产生的二肽一4．氯丁基酯进行手 性柱HPLC分析，与合成的标准品LL型丙氨酸二肽一4一氯丁基酯及LULD 型肉氨酸二肽．4一氯丁基酯进行对照，提出了在反应过程中氨基酸消旋化的 问题，并结合量子化学计算方法解释了氨基酸既可以经历酰氯消旋化，也 可以由氨基酸一磷酸混酐烯醇化而消旋化的机理。 本论文研究发现，通过简单地加热回流，THF在POCl3的作用下可以 顺利地发生开环寡聚反应。并充分利用ESI．MS新技术跟踪反应进程，直 观地观察到中间产物的变化，并用高分辨质谱分析中间产物的组成。依据 ESI．MS跟踪图所显示的中间产物之间的相互关系，提出了由THF的氧原 子亲核进攻POCl3的磷原子产生一个活泼的中间体氧鲶离子的反应机理， 并合理地阐明了中间产物与最终产物的转化关系。利用ESI多级串联质谱 简便快捷地鉴定了中间产物和最终产物的结构。与HPLC或‘H-NMR等分 摘要 析技术相比较，在用于研究包含很多化合物的混合物和复杂的反应系统时， ESI．MS有它们无法比拟的优势，它能提供一种快速的、经济的、准确的方 法用于确定中间产物和最终产物及跟踪反应进程，解释反应机理。 摩尔比变化而变化的情况。从实验结果，发现产物的产率和聚合程度主要 依赖于反应底物的不同摩尔比。当THF与POCl3摩