蛋白质（色氨酸）荧光探针及其剖析应用的研究.pdfVIP

山东人学硕．卜学位论史 摘 要 蛋白质和核酸是生命现象的物质基础。蛋自质担负着各种生理功能，从整体 上维持生物体新陈代谢活动的进行，是生物性状的直接表达者。蛋白质的定量测 定是生物化学和其它生物学科中经常涉及的分析任务，是临床检验中诊断疾病及 检查治疗效果的重要指标，也是许多生化药物分离提纯中质量检验及食品检验中 常见的分析项目。定量测定蛋白质的方法很多，其中探针技术是研究蛋白质结构、 功能、定性、定量的重要手段，对核酸和蛋白质探针的研究己成为生命科学领域 的前沿课题。 本论文从探索新蛋白质(氨基酸)荧光探针、研究其相互作用机理和发光机理 出发，以荧光为主要研究手段进行了研究。论文共分四个部分。 论文的第一部分综述了蛋白质(氨基酸)荧光探针的研究进展及其分析应用， 共引用了126篇文献。 在论文的第二部分中，首次研究了色氨酸(Trp)体系中稀土共发光效应。研究 条件，并在此条件下，建立了Trp的浓度与体系的荧光强度之间的线性方程，并 1．0x10-gmol／1，并对复合氨基酸注射液样品进行了检测，得到满意的结果。同时， 大的络合物，体系的荧光增强是由于分子内和分子间的能量转移以及共发光缔合 物的“能量绝缘壳”作用引起的。 在论文的第三部分中，Eu”能够和金霉素(CTC)反应并发射Eu”离子的特征荧 光，蛋白质的加入可以使荧光强度大大增强。本文实验了体系荧光增强的最佳条 件，并且将其应用于蛋白质(人血清蛋白和牛血清蛋白)的测定中。体系的最佳条 缓冲溶液。在最佳条件下，体系的荧光强度与BSA的浓度在2．O×10-7 1．O×1049／mL x10L1．0×10。5 范围内成线性关系，与HSA的浓度在8．0 g／mL范围内成线性关系． 山东大学碗I：学位论艾 体系的检出限分别达到8．9×10母#mL，3．3x10。8g，InL。该法已用于牛血清中牛血 清总蛋白含量的测定，取得了满意的结果。与别的蛋白质测量的发光方法相比， 该方法具有较宽的线性范围和较好的灵敏度。 在论文的第四部分中，在十二烷基硫酸钠的存在下，Y3+可以与芦丁发生反应 并使芦丁自身的荧光增强，蛋白质的加入可以使这一荧光强度大大加强。实验研 究了体系的最佳条件。在最佳条件下，该体系的荧光强度与蛋白质的浓度在一定 范围内成线性关系，线性范围分别为5．0x10-9 这一环境具有较低的极性和较大的微粘度，这样可使rutin．Y”体系的荧光强度大 大增加。另外，BSA—SLS体系所提供的疏水环境能够减少配合物和水分子之间的 的荧光量子产率提高了，rutin．Y3+体系的荧光强度大大增强。 本论文的主要特点： 1，首次发现并研究了色氨酸体系中的稀土共发光效应并将其应用于色氨酸的 测定中。这对于氨基酸的研究是一个重要进展。本方法不仅拓宽了稀土共发光效 应的应用范围，雨且也为色氨酸的检测提供了一个新的荧光探针。与色氨酸的其 它荧光光度法相比，本方法具有操作简便、快速、线性范围宽、灵敏度高等优点。 2．研究了蛋白质对稀±金属离子配合物Eu一金霉素的荧光增强效应。该体系可 用于实际样品中牛血清蛋白和人血清蛋白的测定。实验结果表明，余霉素和蛋白 质通过静电引力和Eu3+结合形成配合物，蛋白质为Eu-金霉素提供了一个比较好的 疏水环境，并且减少了与水分子碰撞而造成的能量损失，从而使体系的荧光大大 增强。 质的测定。与其他测定蛋白质的荧光方法相比，该方法简便、快速，灵敏度高。 络合物的荧光得到增强。 ll 山东人学硕I：学位论史 上述研究为蛋白质和氨基酸的检测提供了新的灵敏的荧光探针，丰富了稀土 共发光效应的内容，扩大了荧光分析方法的应用范围。 关键词：稀土共发光效应，蛋白，色氨酸，稀土离子，荧光，金霉素，芦丁 ¨ 山东人学颂I：学位论文