洛美沙星和阿莫西林多克隆抗体的制备及ci-elisa检测方法的开端研究.pdfVIP

郑州大埠日士掌位论文 中文摘要 和p．内酰胺类抗生素，目前在临床兽药上应用十分广泛。二者在畜禽食品中的残留都会引 起一系列后果，例如诱导耐药菌株的产生、敏感人群产生过敏反虑等。因此，针对二者残 留的快速检测方法的建立对控制动物性食品的卫生质量、保障消费者健康等方面都具有比 较重要的社会和经济意义。 本研究旨在建立音禽产品中洛美沙星和阿莫两林残留的间接竞争酶联免疫吸附 (ci-ELISA)检测方法。研究内容和结果如F： 1．通过两种方法一碳二亚胺法和混合酸酐法分别把洛美沙星与阿莫西林两种半抗原和载 体蛋白牛血清白蛋白与卵清蛋白偶联制各免疫原(LMF-BsA，AMX．BsA)和包被原 (LMF_OvA，AMx·OVA)。制各的人T抗原经紫外扫描和免疫动物实验进行了鉴定，结果 表明：偶联物的紫外吸收光谱明显具有药物和载体蛋白叠加的特征；通过免疫BALB／c小 鼠制各抗血清利用ELIsA方法进行检测也证明了免疫原和包被原的成功合成。 2．为了制各较多量的多克隆抗体，分别用LMF．BsA和AMx．BsA作为免疫原免疫新西 兰纯种白兔。制各的抗血清分别用问接EusA和间接竞争ELIsA检测效价平¨特异性，结 果如下：洛荚沙星抗血消终点效价在l：640000以上，并且特异性良好；阿莫西林抗血清终 点效价在l：64000左右，但是特异性不理想，经进+步试验验证表明，抗体更多的针对阿 莫西林分解产物，究其原冈是因为免疫原AMx．BsA在免疫过程中已发生部分分解所致。 3．通过优化条件，初步建立了洛美沙星的ci—ELIsA检测方法。选取的检测优化条件为： 抗血清稀释度为1：40000，封闭液为1％的酪蚩白溶液，包被原LMF．OvA的稀释度为1：1000， 辣根过氧化物酶标羊抗兔IgG(HRP-JgG)稀释度为1：l0000。检测结果如F：回闩线性方程 005¨g，ml-5“g，ml之间，检测限为O．024¨g／ml。高低中二个浓度的批山利批问相对标准偏差 的平均值分别为17．7％利23-2％，牛奶样品中的回收率在85％一120％之间。 郑州大掣日±掌位诧i文 4．本实验对洛美沙星残留的的高效液相检测方法也作了一定的研究，建立了标准品和牛 奶样品中洛美沙星的HPLc测定方法，结果如下：对洛美沙星标准品求得的回归方程为： 检测限为0．062峙^11l(s巾忙3)；对牛奶样品用甲醇作处理后进样检测，求得的回归方程为： 提取回收率在70％-80％。以HPLc为标准参比方法验证ci-ELIsA方法的可靠性，求得的 ci-ELIsA法可实际应用于洛美沙星残留的测定。 关键词：洛荚沙星；阿莫西林；多克隆抗体；ELIsA Il 郑州大掣日t±掌位论文 AbstI·act a mat me Lom明oxacm(LMF)is syⅡlhetic蠲tib∞terianbd伽萨tonuoroquinolonegmllp oneofthemostc啪mon tlIat toⅡle aIld蛐oxicillin(AM]()is s伽i—s”tll髂penicillinbclongs have in been u∞d modici士leto仃eatmicrobial p—lact咖groIlp．ney veterinary increasiIl91y in舰dons．Howev盯theLMFaIldAMXr器iduesin锄imaledible矗ssuescouldcauses谢ous h∞ltll eattllese residueremaininmef如dwould pub“c probleIIls．when food，锄