重组人粒细胞-巨噬细胞集落安慰因子发酵工艺和液相色谱法对其复性并同时纯化.pdfVIP

摘 要 液相色谱(LC)对变性蛋白复性是近年来迅速发展起来的一种新的方法，它能 够显著地提高蛋白复性效率，并同时使蛋白得到纯化，目前已成为国际上的研究 热点。本论文先对大肠杆菌(E．cold表达的rhGM．CSF进行了发酵工艺和放大工 艺的研究和优化，得到高表达、高产量的包涵体，然后分别用疏水色谱(HPHIC)、 论文包括以下五个部分： 1．前言 简要的介绍了蛋白质复性的意义，对近年来发展起来的蛋白质复性新方法进 行了系统地综述。对rhGM．CSF的复性及分离纯化研究进展进行了评述。引用文 献99篇。 2．rhGM．CSF摇瓶发酵工艺和放大工艺的研究 通过摇瓶发酵对大肠杆菌DH5wpDH生产rhGM．CSF的培养基、培养温度、 诱导时机、诱导维持时间、接种量等进行了研究，选择了较好的摇瓶培养条件。 结果表明，大肠杆菌适宜在32。c进行培养，在对数生长前期升温至42。C诱导4～5 小时，可获得较高的表达量rhGM．CSF。同时进行了发酵工艺的放大研究。 3．HPHIC对rhGM．CSF复性并同时纯化 纯化，研究了固定相、盐种类、流动相pH、流动相中脲浓度，GSH／GSSG比例等 因素对rhGM．CSF复性和纯化的影响。在优化条件下，经一步HPHIC可以得到比 活为1．58×10 7IU／mg，纯