ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白d表达 纯化 结晶以及结构解析-expression, purification, crystallization and structural analysis of glycoprotein d of herpes simplex virus type ii.docx
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ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白d表达 纯化 结晶以及结构解析-expression, purification, crystallization and structural analysis of glycoprotein d of herpes simplex virus type ii
1.文献综述1.1单纯疱疹病毒的概述疱疹病毒广泛存在于自然界中,能够感染鱼类、两栖类、爬行类、鸟类以及哺乳 类。其中在疱疹病毒中能够感染人的有四种:单纯疱疹病毒(HSV)、水痘-带状疱 疹病毒(HZV)、爱泼斯坦-巴尔氏病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)。感染禽 畜的疱疹病毒常见有 7 种:伪狂犬病病毒(PRV)、马立克氏病病毒(MDV)、牛 传 染 性 鼻 气 管 炎 病 毒 (IBRV)、 马 鼻 肺 炎 病 毒 (ERPV)、 禽 传 染 性 喉 气 管 炎 病 毒 (ILTV)、恶性卡他热病毒(MGFV)、鸭瘟 病毒(DPV)。这些病毒不仅对人类自身 的身体健康造成影响,也对人类的农业生产造成经济损失。疱疹病毒主要侵犯的是皮肤、粘膜以及神经组织。这些感染不同物种的疱疹病毒 在形态上相似,但是抗原性、基因组 DNA 中 G+C 含量和病毒 DNA 的序列均不相同。疱疹病毒是一种 DNA 病毒,对比其他的 DNA 病毒,其病毒颗粒最大而且有一层糖蛋白构成的囊膜。疱疹病毒科的病毒根据其生物学特征以及基因结构分成三个亚 科:α 亚科、β 亚科以及 γ 亚科。α 亚科病毒其宿主范围广,复制周期短,繁殖速度快,是一类溶细胞性感染的病毒,多潜伏在感觉神经节内;β 亚科病毒,该亚科病毒的宿主范围窄,在细胞培养中复制缓慢,繁殖周期长,受感染细胞变大形成巨细胞, 病毒在淋巴细胞内潜伏感染,也可潜伏于分泌腺、肾脏或其他组织;γ 亚科病毒,主要感染 B 淋巴细胞并长期潜伏,大多不引起溶细胞性病变。单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)属于疱疹病毒科 α 亚科。其形 态为直径 120nm~150nm 的球体,由线状双链 DNA、衣壳、被膜及囊膜等组成(图 1)。线状双链 DNA 约有 160kp,衣壳呈二十面体对称,外覆一层厚薄不匀的被膜,最外层为典型的脂质双层囊膜,上有糖蛋白构成的突起。单纯疱疹病毒基因组可编码 100 多种多肽,其中与病毒入侵宿主细胞相关 的囊膜糖蛋白就有 11 种,分别是 gB、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gJ、gK、gL、 gM。gB、gC、gD、gH 诱导细胞融合,并具有诱生中和抗体(gD 最强)和细胞毒 作用(HSV 糖蛋白均可);gH 还能控制病毒从细胞核膜出芽释放。特别地是, gG 具有型特异性,其诱导产生的抗体是单纯疱疹病毒分型的重要依据。单纯疱 疹 病 毒 按 照 血 清 型 分 为 I 型 单 纯 疱 疹 病 毒 ( HSV-1) 和 II 型 单 纯 疱 疹 病 毒(HSV-2)。HSV 的感染极为普遍,潜伏和复发感染者较多。而且易于传播,主要通过身体 接触以及性接触传播。其中 HSV-1 感染人体的口咽部皮肤和粘膜,常引发龈口炎(gingivostomatitis),此外还可引起脑炎、皮肤疱疹性湿疹、咽炎和扁桃体炎。病毒潜伏在三叉神经节(trigeminal ganglia)。HSV-1 引起的临床疾病通常是轻微的,但它引起的散发性致死性脑炎,病程进展快,致死率高,而且,HSV-1 引起的单纯疱疹病 毒性角膜炎(HSK)是一种严重的致盲眼病,病程迁延,易于复发。HSV-2 主要引起生 殖器疱疹,并发症包括生殖器外损伤和无菌性脑膜炎。病毒潜伏在骶神经节(sacral ganglia)。近年来,生殖器疱疹发病率在许多国家不断上升,成为感染率最高的性传 播疾病之一,在发展中国家,因 HSV 与 HIV 共感染使得 HIV 的传播提高 2~4 倍[1]。 与此同时,感染 HSV-2 的患者容易诱发宫颈癌,并且增加了感染艾滋病毒的机率[2]。 由于该病毒的易传播性,其对全球女性的健康有着极大地威胁。目前,针对疱疹病毒的特异抑制性药物主要是在病毒复制的环节上进行抑制。治 疗性药物如 acyclovir,valaciclovir 都能减少病毒的释放并促进患者的痊愈[3]。尽管现有的抗病毒药物应用能缩短单纯疱疹病毒感染的病程,并且在治疗复发性感染上取得 了一些效果,但这些抗病毒药物并不能有效预防疱疹病毒原发感染以及控制疱疹病毒 潜伏感染和复发性感染。因此,为预防和治疗 HSV 引起的原发感染和复发感染,研究一些更为有效,毒性更轻的 HSV 融合抑制物至关重要。图 1 左图为单纯疱疹病毒的模式图,右图为电镜下的单纯疱疹病毒的形态Fig1.left: the model of Herpes simplex virus? right: Herpes simplex virus under electron microscope1.2 单纯疱疹病毒的入侵机制的概述单纯疱疹病毒的感染分为急性感染、潜伏感染以及复活感染。在急性感染过程中, 病毒通过黏附
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