原发性肝癌患者外周血cd4cd25调节性t细胞及tgf-β1在射频消融前后的变化及意义-changes and significance of cd4cd 25 regulatory t cells and tgf - β 1 in peripheral blood of patients with primary liver cancer before and after radiofrequency ablation.docxVIP

1.前言射频消融(radiofrequencyablation,RFA)是近些年来兴起的一种新的局部治疗肝癌的方法。具有操作简便、创伤小、副作用及并发症少、疗程短和安全可靠的优点，引起临床工作者越来越多的重视。RFA治疗所取得的效果是令人满意的。彭振维[1]报道直径3厘米—5厘米的肿瘤手术切除后1年，3年，5年存活率和射频消融两者之间无统计学差异。Chen[2]报道结果相似。小肝癌患者射频消融与手术治疗随机对照研究的存活率和复发率无显著性差异。同样能达到根治性治疗效果，Ia期小肝癌的近期疗效尚优于手术切除[3]。射频和微波消融治疗不仅能直接使肿瘤细胞凝固坏死，原位彻底灭活肝癌组织．而且还能提高肿瘤局部和外周血中免疫细胞数量及其抗肿瘤功能。热消融治疗肝癌可以提高患者淋巴细胞免疫功能，射频消融治疗后CD3+、CD4+T细胞数量较治疗前显著提高，抑制性CD8+T淋巴细胞数量明显降低，CD+4/CD+8比值明显升高，腹腔内巨噬细胞活性均在射频消融治疗后2周开始显著升高，28天时与对照组及治疗前相比仍有显著升高，IL-2和IFN-γ水平明显升高,而IL-4和IL-10水平明显下降[4]。消融治疗后，肝癌患者外周血中NK细胞活性、LAK细胞活性及CD3+淋巴细胞百分比均显著高于治疗前，而手术切除组和经肝动脉栓塞治疗组患者治疗前、后相对应的免疫指标则无显著变化，甚至由于手术创伤，患者术后短期内还出现了免疫抑制[5]。肝癌患者还存在继发性红细胞功能障碍，治疗前后变化均有显著性差异，说明射频消融治疗后机体红细胞免疫功能得到明显改善[6]。射频消融还降低了一些免疫抑制因子如转化因子β1、血清胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和甲胎蛋白(AFP)等[7]。近年来，随着对肿瘤免疫学研究的深入，CD4+CD25+调节性T细胞在抑制肿瘤免疫方面的作用逐渐成为研究热点[8-10]。调节性Ｔ细胞（RegulatoryTcell，Treg），也称为抑制性Ｔ细胞（SuppressorTcell）。Treg细胞来源尚不十分清楚，可能来源与胸腺和外周淋巴组织，分为两个主要类型：自然发生和诱导生成。在临床研究中，发现头颈部肿瘤、肝细胞癌、胃肠肿瘤和上皮恶性病变等患者外周血中Treg细胞数量增加，同外周血一样胃肠肿瘤患者腹水中也发现Treg细胞的存在和数量的增加，且增加幅度与疾病严重程度相关[11-13]。与外周血相比，在黑色素瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、胰腺癌和乳腺癌患者的转移淋巴结中发现更多的Treg细胞。Treg细胞能够抑制许多免疫细胞的活性、增殖及功能，如CD4+Th细胞、CD8+细胞毒性T细胞CD1d限制性NKT细胞、单核巨噬细胞、初始记忆B细胞和树突状细胞（DCs）。Treg细胞本身也可分泌IL-4、IL-10和TGF-β等抑制性细胞因子。TGF-β1是近几年来研究较为深人且颇受人们重视的细胞因子，在组织损伤修复、骨质再生、胚胎发生、肿瘤发生等生理和病理过程中起着关键性作用[14-15]。研究表明，人类许多肿瘤组织包括肝癌在内可通过产生释放TGF-β1而抑制机体的多种抗肿瘤免疫效应，是肿瘤细胞逃避机体免疫系统的监视与杀伤的一个重要机制。肿瘤细胞逃避免疫反应有多种机制,其中最主要的是由TGF-β1激活的肿瘤细胞介导免疫抑制作用。TGF-β1是一种有力的免疫抑制因子，其免疫逃逸作用在体内和体外都已经被证实[15,16]。在荷瘤动物模型中可发现TGF-β1的表达增加可使致瘤的细胞株发生免疫逃逸,促进肿瘤发生;而阻断TGF-β1的信号转导途径，可增强T淋巴细胞的抗肿瘤细胞免疫反应。因此检测作为TGF-β家族最重要成员的血清TGF-β1水平对于原发性肝癌有一定的诊断价值，尤其是对AFP阴性的患者其检测更具临床意义。AFP是诊断原发性肝癌最具有价值的肿瘤标记物，射频消融后一月AFP下降明显，AFP和增强CT或超声造影检查可有效发现射频消融术后肿瘤残留及复发[17-19]。但由于我国原发性肝癌的AFP阳性率为50％-70％．在小肝癌中AFP阳性率仅为33％-65％，因此TGF-β1可以作为新的肝癌肿瘤标记物。了解TGF-β1在射频消融治疗前后的变化可以反映射频消融对肿瘤的治疗情况，对了解疗效有重要意义。射频消融后外周血CD4+、CD25+调节性T细胞和TGF-β1的变化如何，两者之间的关系以及对机体肿瘤免疫的影响是一个十分有意义的课题，目前尚未见相关报道。本课题通过检测射频消融前后肝细胞性肝癌患者外周血CD4+、CD25+调节性T细胞和TGF-β1的变化情况，分析其意义及相关性，阐明二者的变化规律及相互之间的关系，探讨射频消融对肝癌患者免疫功能的影响，进一步明阐明射频消融提高抗肿瘤免疫的部分机制有重要意义。2.材料与方法2.1一般资料RFA组