南方型紫花苜蓿根系盐胁迫应答转录因子鉴定与分析.docVIP

————————————————————————————————————————————————————— 南方型紫花苜蓿根系盐胁迫应答转录因子鉴定与分析 浙江农林大学学报，2016，33（2）：201-208 JournalofZhejiangA＆FUniversity doi:10.11833/j.issn.2095-0756.2016.02.003 马进，郑钢，裴翠明，张振亚 （浙江农林大学风景园林与建筑学院，浙江临安311300） 摘要：转录因子可以调节众多下游基因的表达，在植物抗逆境中起重要的调节作用。为了解析转录因子在南方型紫花苜蓿适应盐胁迫环境的分子机制，以南方型紫花苜蓿Medicagosativa‘Millennium’为材料，以正常培养（WT_ck1）和氯化钠（盐）胁迫（WT_N1）条件下的2个样品根系进行转录组分析，鉴定紫花苜蓿根系盐胁迫应答转录因子基因。同时，随机挑选4个转录因子差异表达基因进行实时荧光定量qRT-PCR（3次重复），验证转录组测序技术（RNA-Seq）结果的可靠性。结果表明：紫花苜蓿根系在250mmol·L－1氯化钠胁迫下72h，共检测到31907个基因表达量发生了改变，表达量差异达到2倍以上的基因共2758个。其中，隶属于38个转录因子家族199个转录因子在盐胁迫下差异表达，上调表达104个，下调表达95个。在各转录因子家族中，盐胁迫应答基因数量最多的是MYB基因家族，其后分别是AP2-EREBP，bHLH，WRKY，NAC和GRAS基因家族，这暗示了紫花苜蓿根系对盐胁迫响应可能是多种转录因子家族共同参与的应答过程。qRT-PCR分析表明：4个随机选择的基因在胁迫前后的表达特点与表达谱测序结果一致。此外，MsERF-2b，MsbHLH，MsbZIP，MsGRAS，MsNAC，MsMGT-3a和MsWRKY等转录因子被选为与盐胁迫应答相关的候选转录因子。该研究结果为阐明植物对盐胁迫的应答机制提供了新的线索。图3表3参36 关键词：植物育种学；南方型紫花苜蓿；转录因子；根转录；盐胁迫 中图分类号：S722.3文献标志码：A文章编号：2095-0756（2016）02-0201-08 Identificationandcharacterizationofsalt-responsivetranscription factorsinrootsofsoutherntypealfalfa MAJin,ZHENGGang,PEICuiming,ZHANGZhenya （SchoolofLandscapeArchitecture,ZhejiangAamp;FUniversity,Lin’an311300,Zhejiang,China） Abstract:Transcriptionfactors（TFs）,whichcanregulatedownstreamgeneexpression,playanimportantroleinplantstressresponses.Inordertoinvestigatethemolecularmechanismofsalttolerance,theTFsofsouthern L－1NaClstress,IlluminaRNA-sequencingwasperformedtoevaluatetypealfalfa,inthisstudywith250mmol· theexpressionspectrumoftranscriptionfactorsinrootsofthesouthernalfalfacultivar“Millennium”.Thentoverifytheexpressionoffourrandomlyselectedgenes,QuantitativeReverse-TranscriptasePolymeraseChainReaction（qRT-PCR）（threerepeated）wasused.Resultsshowed31907differentiallyexpressedgenes,2758ofwhichshowedadifferenceofovertwofold.Amongthesegenes,199transcriptionfactorsbelongingto38TFfamilieswereup-regulatedand95weredown-regulated.GenesfromtheMYBfamilywereobservedmost,fol-lowedbyAP2-EREBP,bHLH,WRKY,NAC,andGRAS.