乐果对大鼠血清单胺类神经递质影响.docVIP

乐果对大鼠血清单胺类神经递质影响 　　乐果是中国最常用的有机磷农药。有机磷农药在我国占目前登记的农药品种的40%（含混剂）。农药使用不当或误服使得有机磷农药急性中毒成为目前农村地区中毒死亡的主要原因，死亡率为10％左右。城市中屡见食用农药污染的蔬菜引起中毒的报道。有机磷农药污染相当严重，城市人口70％尿样中检出有机磷代谢产物。 　　目前国内外对乐果的受体研究以及乐果对氨基酸类神经递质影响的研究较多。有机磷农药抑制胆碱脂酶造成乙酰胆碱积聚，从而启动一系列的病理生理变化［1-5］。而乐果对大鼠血清单胺类神经递质的影响，在国内罕见相关研究报道。分析不同剂量乐果染毒的大鼠血清中多巴胺、去甲肾上腺素、5-羟色胺、肾上腺素单胺类神经递质的变化规律，对进一步阐明乐果中毒机制具有实际意义。 　　 　　1材料与方法 　　1.1动物 　　本实验用大鼠为成年雄性SD大鼠，体重190－210g，复旦大学动物部提供。剂效反应：将大鼠随机分为对照组（生理盐水）、低（32.25mg/kg）、中（69.6mg/kg）、高（150mg/kg）剂量组（染毒剂量的设置是根据最小致死剂量以及安全系数，并做预实验），腹腔注射乐果，每组8只。时效反应：大鼠用?104mg/kg乐果分别于4h、8h、24h、48h腹腔注射（时程的确定是根据乐果的代谢周期、半衰期以及有关因素而定），每个时程8只。乐果纯度99％（上海允发化工有限公司产品），用生理盐水配制成低、中、高染毒剂量。 　　剂效反应：大鼠染毒后2h断头处死并取出血液分离血清。时效反应：在染毒后4、8、24、48h后断头处死分离血清。将制备的血清低温保存作为实验样品。血液经离心后取出200μL的血清，在血清中加入2mL正丁醇，经震荡处理3min，然后经过1 　　ｒ/ｍｉｎ离心15ｍｉｎ，加入0.5mL0.1M的高氯酸、正庚烷2mL，经震荡处理3min，再以3600ｒ/ｍｉｎ离心3ｍｉｎ，除去有机相，加入氯仿2mL，经震荡处理3min，再以3600r/min离心3min。取上层水样直接进样，进样量均为20.0μl. 　　1.2试剂 　　流动相为缓冲液、多巴胺盐酸盐、5-羟色胺盐酸盐、内标(IS)3,4二羟苄胺溴酸盐,均购自Fluka公司。上述标准品分别用0.1M的高氯酸配成质量浓度为1.0mｇ/mL的标??储备液,贮存于4℃冰箱内,分析时用0.1M的高氯酸稀释。其余试剂为优级纯或分析纯试剂。实验用水均为二次蒸馏水。实验在室温下进行。 　　1.3仪器 　　ＬＣ-10Ａ型高效液相色谱仪(日本SHIMADZU)、WATERS460电化学检测器(美国WATERS公司),SrAdv色谱工作站(上海军锐信息技术开发有限公司)。玻碳电极为工作电极,Ａｇ/ＡｇＣｌ电极为参比电极,设定电压为+650ｍＶ。HypersilＯＤＳ-3柱(250ｍｍ×46ｍｍ,日本GL公司)附带有一个10ｍｍ×46ｍｍ保护柱（DIKMA公司）。MicroMaxRF高速离心机(国际仪器公司IEC)，LXJ-ⅡB低速离心机(上海安亭科学仪器厂)。 　　1.4数据分析 　　用SPSS统计分析软件进行数据分析，采用单因素方差分析。 　　 　　2结果 　　血清剂量组5-HT的浓度比对照组高，有统计学差异（P0.05)。剂量组NE的浓度与对照组有统计学差异(P0.05)。剂量组E的浓度与对照组无统计学差异(P0.05)，见图1。 　　血清NE浓度和5-HT浓度随染毒时程增加有下降趋势，与对照组相比不同时程的NE浓度和5-HT浓度无统计学差异(P0.05)，见图2。 　　图1不同剂量组的单胶类神经递质浓度的变化（n=8） 　　图2不同时程单胺类神经递质浓度的变化(n=8)3讨论 　　乐果对温血动物毒性较低，杀虫谱广且效果好，在不同环境下代谢产物易水解、氧化，在自然环境中，降解快且残留期短，对生态环境不易造成长期污染，所以是农作物除害时常用的农药。但乐果使用不当，也常发生农药中毒。中毒原因主要抑制了胆碱酯酶的活性，造成乙酰胆碱大量蓄积，出现了中毒症状［1］。但有些中毒症状尚不能完全以抑制胆碱酯酶的活性来解释。 　　本次SD大鼠乐果染毒的急性毒性实验，分高、中、低3个不同剂量组和对照组。大鼠腹腔乐果染毒后，低、中剂量组出现不同程度的震颤、四肢抽搐、眼睑周围充血。高剂量组出现震颤、四肢抽搐、眼睑周围充血早，且有瘫痪症状。实验中发现，中毒大鼠的血清单胺类神经递质含量随乐果染毒剂量的不同出现了明显的变化（去甲肾上腺素、五羟色胺含量明显升高，多巴胺明显降低），存在剂量反应关系。 　　SD大鼠乐果腹腔染毒后3－4h之间，震颤、四肢抽搐、眼睑周围充血最为严重。4h后症状逐步缓解，8h后症状基本消失（除高剂量组大鼠仍瘫痪）。此次实验数据显示大鼠腹