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Sun Yat-Sen University -- Weiwei Zeng * 谢 谢！ Sun Yat-Sen University -- Weiwei Zeng * HPLC介绍 －－Weiwei Zeng Sun Yat-Sen University -- Weiwei Zeng * 原理及适用范围 1 HPLC装置介绍 2 操作高效液相的流程及注意事项 3 色谱柱的管理 4 Sun Yat-Sen University -- Weiwei Zeng * High Performance Liquid Chromatography 分离原理：溶于流动相（mobile phase）中的各组分流经固定相（stationary phase）时，与其发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和），根据它们作用的大小、强弱不同，在流动相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。 按分离机制分：液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。 一 HPLC原理及适用范围 Sun Yat-Sen University -- Weiwei Zeng * 高沸点不易挥发的、受热不稳定易分解的、分子量大、不同极性的有机化合物；生物活性物质和多种天然产物；合成的和天然的高分子化合物等。 占全部有机化合物的80%。其余20%的有机化合物，包括永久性气体，易挥发低沸点及中等分子量的化合物，只能用气相色谱法进行分析。  一 HPLC原理及适用范围 Sun Yat-Sen University -- Weiwei Zeng * 进样器 色谱柱 输液泵 检测器 START 操作系统 二 HPLC装置介绍 Sun Yat-Sen University -- Weiwei Zeng * 输液泵 根据泵的结构可分为一元泵、二元泵、四元泵等 根据泵的压力可分为低压单元、高压单元等。 参照阀 二 HPLC装置介绍 Sun Yat-Sen University -- Weiwei Zeng * 进样器 操作方式分： 手动进样和自动进样。 Sun Yat-Sen University -- Weiwei Zeng * 色谱柱 常用填充剂： 硅胶 凝胶或玻璃微球等填充剂 离子交换树脂 化学键合硅胶 十八烷基硅烷键合硅胶， 辛基硅烷键合硅胶， 氰基或氨基键合硅胶。 Sun Yat-Sen University -- Weiwei Zeng * 检测器 检测物质分离情况： 紫外，蒸发光散射等等 Sun Yat-Sen University -- Weiwei Zeng * 5 3 1 2 流动相 的准备 进样前的 仪器准备 进样前样 品的准备 进样分离 清洗系统 和关机 HPLC操作流程 4 三、 Sun Yat-Sen University -- Weiwei Zeng * 1 流动相的准备 1.容器必须洗净，以保证取得较好的检测结果。 2.所用的流动相试剂必须是色谱纯、优级纯或分 析纯。在做HPLC前所有的流动相，包括水相 和有机相均需过滤操作。使用0.22μm的微 孔滤膜。 3.超声使流动相中的气泡消失，以免使泵压增 高，影响柱子分离效率。 STEP 1 Sun Yat-Sen University -- Weiwei Zeng * 低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等 选择时应考虑一下方面： 1. 流动相应不改变填料的任何性质。 低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某 些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。 ATTENTION 流动相的性质要求 Sun Yat-Sen University -- Weiwei Zeng * 2. 纯度。 色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。 3. 必须与检测器匹配。 使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。 4. 样品易于回收。应选用挥发性溶剂。 Sun Yat-Sen University -- Weiwei Zeng * 5. 粘度要低（应2cp）。 高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。最好选择沸点在100℃以下的流动相。 6. 对样品的溶解度要适宜。 如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀