荧光适体传感器在金属离子和生物小分子检测中的应用研讨.pdfVIP

中文摘要 随着社会的发展和人们生活水平的提高，环境问题和自身的健康 状况引起了越来越多的重视。对金属离子及生物小分子的分析检测在 疾病的预防诊断、人们生活质量的提高等方面都具有极其重要的意 义。核酸适体(印t锄er)的出现为生化分析领域注入了新的力量。 适体是一种通过体外筛选分离出来的单链寡核苷酸片段，对于大部分 的目标物具有高亲和性和特异性，如小分子，蛋白质，金属离子，药 物，甚至是完整的细胞。由于其具有特异性强、目标物广泛、易合成、 易修饰、稳定性强等优点，核酸适体传感器成为了分析界的新生力量。 本论文结合适体和荧光技术，设计了三种荧光适体传感器用于金属离 子和生物小分子的检测，主要内容如下： 1．基于类似于辣根过氧化物酶的DNAZyme，发展了一种新的无 标记荧光适体传感器用于钾离子的测定。钾离子存在时，富含G的 DNA折叠成G．四链体结构，从而使血红素得以嵌入到G．四链体结构 中形成Ⅷ冲．DN丸≯me。DNA巧me能催化双氧水氧化卸，PA生成一 种荧光产物。其荧光强度随着钾离子浓度的增加而增强。在最优条件 下，荧光强度与钾离子浓度的对数成线性关系，线性范围是2．5州到 5 mM。其他的金属离子均无明显的干扰。这种荧光适体传感器操作 简单、灵敏度高、特异性强，在离子的检测和疾病的诊断中具有广泛 的应用前景。 2．基于c．《．c复合物的形成，构建了一种灵敏的无标记 OFF—oN—OFF荧光适体传感器用于银离子和多巴胺的测定。银离子存 在时，银离子直接与胞嘧啶上的N3结合形成金属介导的c-Ar．c双 链，SG得以嵌入双链并产生强荧光。SG的荧光强度随着Ag+浓度的 增加而增强，从而发展了一种“劬mon型荧光银离子传感器。多巴胺 的加入会使得体系荧光减弱，SG的荧光强度随着多巴胺浓度的增加 而减小，从而发展了一种“仙mofP’型多巴胺荧光传感器。该法制各的 传感器简单灵敏，可检测低至3．3 IM的银离子和1州的多巴胺，为 双输出检测的发展提供了一种新的方法。 3．基于鸟嘌呤(G)的猝灭效应，构建了一种简便灵敏的荧光适体 传感器用于腺苷的检测。F—蝴标记的腺苷适体与末端含五个G的DNA 序列部分互补，腺苷不存在时，F—W标记的适体与互补链的杂交使G 现，导致FAM的荧光被G有效猝灭。腺苷加入后，适体与腺苷结合， 导致互补链的释放和F创Ⅵ荧光强度的恢复。该传感器线性范围为 20一200山，检出限为6．7州(黝怔3)。更重要的是，该方法制备的 传感器无需使用有机染料分子标记的DNA或使用额外的纳米材料作 为猝灭剂，具有简单灵敏、成本低等优点。 关键词：荧光适体传感器；DNAZyme；C—Ag+一C；G猝灭剂；无标记； 双输出检测 ABSTRACT Withme of and竹le of people’s developmentsociety improVement enVironmentala11d healthhave 蛐dard， people’s liVing problems a七tractedmoreandmoreattentions．Itis to anddetect significantanalyze intlleareaoftlle metalionsa11d smaUmolecules preVemion bi0109ical andme of 1ife a11d ofdisease diagIlosis inlproVementp