南方红豆杉多糖测定.docVIP

南方红豆杉多糖测定 　　关键词 南方红豆杉 多糖 蒽酮-硫酸法 含量测定 　　 　　红豆杉为世界濒危珍稀植物,是第四纪冰川后的孑遗物种,素有“植物黄金”之称[1]。我国红豆杉有4种及1个变种。南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)即是变种,系裸子 　　植物亚门、松杉纲、红豆杉目、红豆杉科中红豆杉族下的红豆杉属植物[2],产于我国长江流域以南,为红豆杉属植物在我国分布最为广泛的一种[3]。红豆杉药用历史久远,在我国医学中早有记载:《本草纲目》就记有红豆杉治疗霍乱、伤寒及排毒等疗效;在现代《中药大辞典》、《东北药植志》、《吉林中草药》、《本草推陈》等医药书中还有进一步的记载:入药可利尿、通经,对肾病、肠胃病、糖尿病有独特疗效[4]。近年来,有药效实验发现红豆杉中所含的多糖对S180荷瘤小鼠、levis肺癌小鼠和HepA肺癌小鼠具有一定的抑制肿瘤作用,可以提高荷瘤小鼠的生命延长率,提高荷瘤小鼠的免疫细胞功能,表明对免疫功能有较好的促进作用[5]。为了更好地利用这一宝贵资源,同时为红豆杉多糖的药用奠定基础,我们用蒽酮-硫酸法[6]对南方红豆杉中多糖含量测定方法进行了研究。 　　 　　1 实验方法 　　 　　1.1 仪器与试剂:分述如下。 　　1.1.1 仪器:UV-2000紫外-可见光分光光度计(优尼科上海仪器有限公司),DHS20-1分析电子天平(上海天平仪器厂),DKS-24型电热恒温水浴锅(嘉兴市中新医疗仪器有限公司),LXJ-IIB型离心机(上海安亭科学仪器厂),DGG-9070A电热恒温鼓风干燥箱(上海森信实验仪器有限公司)。 　　1.1.2 试剂:无水标准葡萄糖(中国生物制品检定所),无水乙醇,浓硫酸,蒽酮,正丁醇,三氯甲烷,石油醚均为市售分析纯。 　　1.1.3 材料:南方红豆杉药材粉末由红豆杉企业各大基地提供。经鉴定为南方红豆杉5年生干燥枝叶粉末。 　　1.2 实验方法:分述如下。 　　1.2.1 蒽酮-硫酸试剂的配制: 　　精密称取200mg葸酮置于烧杯中,沿烧杯内壁缓慢加入浓硫酸100ml,边加边搅拌,直至蒽酮完全溶解后溶液呈黄色透明,并将其置于棕色瓶中于冷暗处密封保存。 　　1.2.2 样品供试液的制备: 　　样品系采用南方红豆杉的枝叶,因其含有大量的蜡质、叶绿素等脂溶性成分,首先对药材进行石油醚脱脂处理??其次对药材提取次数、醇沉浓度、脱蛋白、脱色工艺等进行了单因素考察,确定了合理的供试液制备方法。 　　精密称取南方红豆杉粉末1.00g,加200ml蒸馏水超声提取30min,再回流提取1.5h,3次,过滤,合并滤液,将滤液浓缩定容至50ml后,加粉末型活性炭1.5g,在60℃水浴中搅拌加热30min后过滤,将滤液进行Sevag法除蛋白{(正丁醇:氯仿5∶1):滤液1∶5},于分液漏斗中反复进行至溶液分界面交界处无白色混悬,合并滤液,浓缩定容至50ml后,从中准确吸取1ml浓缩滤液加乙醇至含醇量达85%,在4℃下静置30min后,4000rpm离心,将离心后的沉淀部分取出,用蒸馏水溶解定容至10ml容量瓶中,即得。 　　1.2.3 标准曲线的绘制: 　　精密称取于105℃干燥至恒重的无水葡萄糖12.0mg,用蒸馏水溶解并定容至100ml容量瓶中,摇匀,得葡萄糖标准溶液。分别从葡萄糖标准溶液中精密吸取0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml于干燥具塞试管中,分别加蒸馏水至1.0ml,每管加蒽酮-硫酸试剂2.5ml,加塞,立即摇匀,室温(25℃)放置1min后,置于冰水浴中10min后取出,再室温放置10min后,于625nm处测定吸光值(A)。以吸光值(A)为纵坐标,对葡萄糖浓度(C)为横坐标作标进行线性回归,进行计算,得回归方程为Y=5.0583X+0.1268,R2=0.9996,表明葡萄糖的浓度在0.024~0.120mg/ml与吸光值呈良好的线性关系。 　　1.2.4 重复性试验: 　　精密称取同一批次南方红豆杉1.00g,5份,按照1.2.2供试液制备方法进行处理后,分别于625nm处测定吸光值(A)。 　　1.2.5 稳定性试验: 　　精密称取南方红豆杉粉末1.00g,按照1.2.2供试液制备方法进行处理,分别于0h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h测定吸光值(A)。 　　1.2.6 回收率试验: 　　精密称取与重复性试验相同批次的南方红豆杉粉末0.50g,5份,按照1.2.2供试液制备方法进行处理至离心取出沉淀物,分别将各沉淀物置于干燥具塞试管中,再分别于每份沉淀准确加入标准葡萄糖溶液0.5ml,并分别用蒸馏水稀释至1ml后,每管加蒽酮-硫酸试剂2.50ml,加塞,立即摇匀,室温(25℃)放