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反义药物开发与研究进展 　　反义药物是近20多年来发展起来的一种以反义核酸技术为基础开发的以治疗为目的安全有效的新型药物。反义药物（Antisense drugs）指的是反义脱氧寡核苷酸类药物，主要包括反义DNA（AS-ODN），反义RNA（AS-ON），多肽核酸（PNA），核酶（ribozymer）等。其主要是根据碱基互补配对原则和核酸杂交原理，利用人工合成、天然存在的互补寡核苷酸片段，以反向互补方式特异性地与目的基因（单链、双链）或信使核糖核酸（mRNA）的特定序列相结合，从基因复制、转录、剪接、转运翻译等水平上调节靶基因的表达，干扰遗传信息从核酸向蛋白质的传递，从而达到抑制、封闭或破坏靶基因表达，达到治疗疾病的目的。因此，反义药物是对多种疾病都有潜在治疗价值的新型药物。自1978 年Stephenson 和Zamenick首次报道与病毒核酸序列互补的13mer反义寡聚脱氧核苷酸能够抑制Rous病毒复制，提出了反义寡聚脱氧核糖核酸能够抑制特定基因表达的概念，并预测了在治疗病毒性疾病和癌症方面的前景。 　　 　　伴随着核酸治疗技术的发展，反义药物的开发与研究逐步展开，许多药物开发公司开始采用反义原理将寡核苷酸药物用于阻止一种特异性疾病相关的蛋白的表达，因为寡核苷酸能够阻止或破坏负责该蛋白合成的信使RNA（mRNA）。世界上首个经批准上市的反义药物是美国Isis制药公司生产的福米韦生（Vitravene,ISIS2922），分别于1990年经欧洲药品评价局（EMEA）批准在欧洲上市和1998年经美国药品与食品管理局(FDA)在美国上市。该药由21个硫代磷酸酯寡核苷酸组成，是用于治疗艾滋病病人并发的巨细胞病毒性（CMV）视网膜炎。由于福米韦生是直接通过眼内注射给药，所以不存在反义药物进入靶组织剂量不足的问题。 　　通过研究人员在试验中进行一系列的化学改进，反义药物的功效已得到明显的提高并且许多公司取得了突破。尤其是在发现了RNA干扰机制――在植物和动物体内的一种天然反义机制之后，先后成立了诸如Alnylam制药公司(Alnylam Pharmaceuticals, Inc.)和Sirna治疗制剂公司（Sirna Therapeutics）等制药和生物治疗制剂公司，它们正在开发被称作短干扰RNA(siRNA) 的合成双链RNA,并将其作为高效价的反义药物。最近，人们又认识到，siRNA在细胞内不会受到称作RNA诱导沉默复合体（RISC）的一种特异机制的损伤，并且RISC是2条RNA链（反义链）中唯一能与mRNA靶结合并激活的一条链。另外，研究人员还认识到，像锁核酸（LNA）等RNA类似物可作为单链高亲和力的反义药物。进入临床试验阶段的第三代核酸治疗制剂包括双链（siRNA）和单链（LNA）寡脱氧核苷酸化合物。 　　 　　第一代RNA抑制剂 　　 　　第一代反义药物是由合成DNA单体制成的。它经修饰后仅含一种硫磺物质，以替代核苷酸之间磷酸连接的氧分子。迄今，由于这种称作硫代磷酸酯变体的硫代磷酸酯寡脱氧核苷酸（PS-ODN）在遇到组织核酸酶时能提高药物的稳定性，并且能延长血浆的半衰期，所以它广泛应用于多数寡脱氧核苷酸类药品中。例如Isis制药公司生产的福米韦生和Genta 制药公司目前再次向美国食品与药品管理局（FDA）递交了新药申请（NDA）的奥利默森纳(oblimersen sodium，Genasense)均为DNA 硫代磷酸酯类药物。由于它们对靶RNA的结合亲和力较弱并对核酸酶消化产生连续的不适当抗性，所以它们的主要问题是相对缺乏潜能。据有关研究报道，在灵长类动物的试验中DNA硫代磷酸酯制剂出现的急性毒性也限制了其用药剂量。迄今，在分别对7种DNA寡脱氧核苷酸制剂进行的III期临床试验中，有6种因难以达到最初的设计要求而终止，仅有Gentia制药公司的奥利默森纳注射液在对复发性或不应期慢性淋巴细胞白血病(CLL)病人进行的临床III期试验中达到了最初的设计要求，并2006年3月该公司有向FDA递交了将奥利默森纳注射液加氟达拉滨（fludarabine，Fludara ）和环磷酰胺（cyclophosphamide，Cytoxan ?）合用治疗复发性或不应期慢性淋巴细胞白血病的申请，目前正在审批之中。Gentia制药公司曾于2003年12月向FDA递交了将奥利默森纳注射液加达卡巴嗪（dacarbazine，DTIC-Dome?）合用治疗晚期黑素瘤的申请，2004年5月，未得到FDA的批准，该公司撤回申请。但是，该公司于2006年1月又向欧洲药品局(EMEA)递交了将奥利默森纳注射液加化疗制剂治疗晚期恶性黑素瘤的申请，目前，正在审批之中。另外，还有数中DNA寡脱氧核苷酸制制剂正在进行II期临床试验，具体见表1。