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36-奶粉中三聚氰胺的测定 奶粉中三聚氰胺的测定 奶粉中三聚氰胺的测定 1原理 三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，微溶于水，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等。本方法采用20%甲醇溶解样品，5%三氯乙酸沉淀蛋白，提取样品中的三聚氰胺，经液相色谱仪C18柱分离，检测波长235nm条件下进行检测。 2试剂 使用优级纯、色谱纯试剂，色谱用水符合GB / t6682一级水的规定。 2.1 20%甲醇溶液：甲醇+水（2 + 8） 2.2 5%三氯乙酸溶液：称取三氯乙酸5g溶解于100ml水中。 2.3乙腈 2.4混合液：称取2.10g一水合柠檬酸和1.88克己烷磺酸钠，溶于水中，稀释至1000ml混匀。 2.5流动相：混合液（2.4）+乙腈（2.3）= 92 + 8。 2.6标准储备液配制：准确称取三聚氰胺标准品0.1000g，用20%甲醇溶液（2.1）定容至100ml。三聚氰胺含量为1.00mg/毫升，于4℃冰箱内避光保存。 2.7三聚氰胺标准系列的配制：准确吸取标准储备液（2.6）0.100ml；1.00ml；2.50ml；5.00ml；10.00ml至100ml容量瓶中，并用20%甲醇溶液（2.1）定容至刻度。配制成三聚氰胺浓度分别为1.00mg/L；10.0mg/L；25.0mg／L；50.0mg／L；100mg/L的标准系列。 3仪器和设备 3.1液相色谱仪：附二级管阵列检测器（爸爸）或紫外检测器（UV） 3.2超声波清洗器 3.3超速离心机 3.4涡旋混合器 3.5滤膜：0.45μ 4分析步骤 4.1试样处理：将奶粉样品混匀，准确称取样品1～5g于50ml比色管中，加入20%甲醇溶液（2.1）约35ml，震荡混匀，超声提取5min，加入5%三氯乙酸（2.2）5ml，并用20%甲醇溶液（2.1）定容至刻度，摇匀。以为3000rpm/min时超速离心5min。取上清液经0.45μM滤膜过滤，备用 4.2色谱参考条件 4.2.1流动相：10mmol/L己烷磺酸钠+ 10mmol/L柠檬酸∶乙腈= 92∶8； 4.2.2流速：1.0ml/min； 4.2.3柱温：35℃； 4.2.4检测器：二极管阵列检测器（爸爸）或紫外检测器（UV），波长235nm； 4.2.5色谱柱：C18柱子250mm×4.6毫米，5μM； 4.2.6进样量：10～20μ 4.3色谱分析：进样10～20μL标准使用液及样品处理液于高效液相色谱仪中，以保留时间及光谱定性，以样品峰面积与标准系列比较定量 5结果计算 样品中三聚氰胺含量按下列公式进行计算。 式中：X样品中三聚氰胺的含量，单位为毫克每千克（毫克/公斤）； C从曲线上查出样品中三聚氰胺浓度，单位为毫克每升（毫克/升）； V- the total volume in the sample is in ml (mL); M- sample quality, unit is gram (g). 6 chromatogram Figure 1 melamine standard high performance chromatogram (1- melamine) Figure 2 UV absorption spectrum of melamine standard Fig. 3 liquid chromatography of melamine in milk powder samples (1- melamine) Fig. 4 ultraviolet absorption spectrum of melamine in milk powder sample 7 fine density The absolute difference between the two independent measurements obtained under repeated conditions should not exceed 10% of the arithmetic mean. 8 other 8.1 standard curve and linear range Under the above experimental conditions, the standard curves of melamine concentration were 0.911, 9.11, 22.8, 45.6 and 91.1mg/L respectively. The standard curve was drawn by comparing the peak area and the concentration: Linear equations and correlation coefficients: