第二章-微生物菌种选育-董媛.pptVIP

但接种量过大或者过小，均会影响发酵。过大会引起溶氧不足，影响产物合成；而且会过多移入代谢废物，也不经济；过小会延长培养时间，降低发酵罐的生产率；接种量还对菌丝形态有影响。 通常接种量，细菌1~5%，如由棒状杆菌生产谷氨酸和嗜碱性芽孢杆菌生产碱性蛋白酶的发酵中，接种量只需1%。 酵母菌5~10%，霉菌7~15%、有时20~25%如抗生素生产菌。 菌 连续在培养基上（内）移种 种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种 保 固体斜面 藏 湿法 半固体琼脂柱 方 休眠态 液体介质（蒸馏水、糖液、矿物油） 法 干法 藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上（沙土、硅胶等） 二、菌种保藏 蒸馏水悬浮法 斜面传代保藏 矿物油中浸没保藏 干燥载体保藏 冷冻保藏 真空冻干保藏 微生物菌种保藏方法 斜面传代保藏 可用于各类微生物的保藏 4℃保藏 不适宜长期保藏，一般保存3～6个月 经常转接（3~6个月转接一次） 矿物油保藏法：液体石蜡 保藏时间1~2年 干燥载体保藏法：沙土 保藏时间1～10年 冷冻保藏（菌种对数期）： 普通冷冻保藏技术（-20℃） 微生物活力可维持1~2年，不适宜长期保藏 超低温冷冻保藏技术（-60 ℃ 以下） 终浓度8~10%甘油或5%二甲亚砜 保存5年 液氮冷冻保藏技术 最佳保藏方法 真空冻干保藏 原理：水分升华 菌种的稳定期 保护剂：脱脂乳、蔗糖、动物血清 菌种活力10年不丧失 安瓿管 寄主保藏：动植物病原菌和病毒 基因工程菌的保藏（质粒）： 保藏在含低浓度选择剂的培养基中 几种常用菌种保藏方法的比较 方法名称 主要措施 适宜菌种 保藏期 评价 冰箱保藏法（斜面） 冰箱保藏法（半固体） 石蜡油封藏法* 沙土保藏法 冷冻干燥法 低温 低温 低温、缺氧 干燥、无营养 干燥、无氧、低温、有保护剂 各大类 细菌、酵母菌 各大类** 产孢子微生物 各大类 3~6月 6~12月 1~2年 1~10年 5~15年以上 简便 简便 简便 简便有效 简便有效 第四节 微生物菌种的扩大培养 菌种制备的过程 1 影响菌种质量的因素 2 菌种的扩大培养 3 1.什么叫种子※ 将冷冻干燥管、砂土管中处于休眠状态的工业菌种接入试管斜面活化后，再经摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种的过程。这些纯培养物都称为种子。 第四节 微生物菌种的扩大培养 中试 小试 任务：提供发酵产量高、性能稳定、接种数量足够的、纯的培养物 2、实验室种子培养 实验室种子培养阶段目的是为种子罐提供种子，包括琼脂斜面、固体培养基扩大培养或摇瓶液体培养。 （1）固体斜面菌种培养 （2）固体培养基扩大培养 （3）摇瓶液体培养 3、生产车间种子制备 （1）种子罐培养基 （2）种子罐接种 微孔接种法：利用注射器在罐的接种口橡皮膜上注入罐内进行接种。 （3）种子罐级数 种子罐级数是指制备种子需要逐级扩大培养的次数。 种子罐级数的确定 种子扩大的级数：制备种子需逐级扩大培养的次数 种子罐级数越少，越有利于简化工艺和控制，并减少由于多次转种而带来的染菌机会以及减少因种子罐生长异常而造成的发酵波动 但考虑能否在一定时间内获得优质、足量的种子以满足发酵的需求 确定方法 取决于： 菌种生长特性、孢子发芽及菌体繁殖速度 所采用发酵罐的容积 举 例 酵 母 细 菌 四级发酵 三级发酵 二级发酵 青 霉 菌 放 线 菌 二级发酵 影响种子质量 的因素 接种量 种龄 染菌控制 培养基 培养条件 4.影响种子质量的因素 （1）培养基 生产过程中经常出现种子质量不稳定的现象，其主要原因是原材料质量波动。 配制产孢斜面培养基用的麸皮，因小麦产地、品种、加工方法及用量 制备霉菌用的大米，其产地、颗粒大小、均匀程度不同 蛋白胨加工原料不同（如鱼胨或骨胨） 水质的硬度、污染程度 原材料质量的