毛细管电泳和化学发光联用方法的研讨.pdfVIP

摘 要 毛细镑电泳(CE)分离技术因其分离效率高、分离速度快、样品消耗小、 分离装置简单和操作成本低等优点，成为一种强有力的分离分析技术，特别是对 复杂化合物的分离更具有显著的分辨能力。但CE采用极小的样品体积和极细的 毛细管内径，使光度检测法的浓度检出限变麓。化学发光(cL)检测的一个主 要特性是它的光路系统简单便宜，不需要光源，这样就避免了杂散光和光源不稳 定的彩晌，从而使它的背景低，灵敏度高。同时，CL是实现小体积，在线检测 豹理想方法，主要是癌予它翡凝痖遮度茯，允许在裙对大体积酌流动滟中袄速裣 溅焉不会产生因为体积大嚣带寒懿嚣带惩宽。CL浆这整饶点傻宅更接近瑾想静 检测体系，因藤号l起广泛豹硬突。 本论文在蕞细管电泳．化学发光联用研究工作的基础上，提出了一秘麓单霹 熊的联用梭测体系，并对其作了改进。反应管的改进是用改性聚四氯乙烯管作反 应管，与毛细管作反应管比较，前袭的分离效率不如毛细管的好，但分离度并不 麓，同时由于管子的透光性好，发光检测的横截面积比毛细管的大，所以检测到 的信号比詹者强。同时，使用这种柔软的管予做反应管插接容易，接口处的气泡 翁排除，使体系简单稳定。高电位端缓冲池的改进将含鲁米诺缓冲液的高电位池 与电椴沲分隔开，解决了支持缓、辟液中鲁米诺电解造成的发光信号的漂移问题； 低窀像端缓、挣滚静改进楚密盈端采雳流动隔离潼，纯学反巍君翡废液能及拜于撵 走，不污染缓冲溶液。戬上两方霞致进霹避免发走试裁鹃撰耗窝延长缓滓滚使蠲 时藤。与蕺缨謦电泳躲紫於吸收检测法翘毙，CE-CL法款浓度捡出眼改善了掰 个数量级；整个体系篾单稳定，能够应用于实际样晶分辑。 采用此联用系统和鲁米诺．铁氰化钾间接化学发光法，分离绿原酸和芸褥萤， 与毛细管电泳．紫外吸收法比较，毛细管电泳-化学发光法的梭出限达到1．4×lO。 mol／L，比琵细管电泳．紫外吸收法改善约2个数量级。实验中发现基体对化学发 光有抑制作用，使被抑制的化学发光基线形成类似于高斯型分布，而我们的标准 溶液的谱圈的基线无基体千扰。分析原因发现，样品基体是有色的电中性物质， 在电泳中不能祷翻分离，褥是发生扩散，产生类似离新燮的化学发光帮箭背景信 号，分析物的化学发光反应的抑制信号叠加在它的上面，影响我们的分析检测。 因此我们采用标准加入法并对其背景进行手工描绘扣除，得到回归方程具有良好 的线性相关系数，分析物的含量符合烟叶中的含量范围。 Il Abstract most forthe of CEhas oneofthe become complex analysis powerfulseparationtechniques for andlow cost itcRn velocity operation efficiency，fastanalysis highseparation samples provide ofits detection ofCEisstilla in because sensitivity chaUengepractice compared，However,the with volumeandsmall inner tinysample