神经干细胞向多巴胺能神经元定向分化的蛋白质表达差别研究 课件.pptVIP

神经干细胞向多巴胺能神经元定向分化的蛋白质表达差别研究 导 师： 报告人： 2006年12月4日 报告内容 课题介绍 前期实验进展 后期实验安排 课题介绍 神经干细胞与多巴胺能神经元 神经干细胞分化前后的蛋白表达 蛋白质与蛋白质组 实验方案 前期实验进展－1.细胞培养 神经干细胞的分离培养与诱导分化 SH-SY5Y和N2a细胞及其诱导分化 2. 蛋白浓度测定（mg/ml） 3. 全蛋白溶液消化 1 将提取的细胞（NSC,N2a，SH-SY5Y）及诱导后的细胞(N2a，SH-SY5Y) 总蛋白溶解于6M Guanidine-HCl；往溶液中加入1M DTT至终浓度2-5mM; 2 95℃加热15-20min，冷却至室温； 3 加入1M IAM至终浓度20mM，室温暗处孵育45min； 4 加入50mM NH4HCO3(pH7.8)稀释Guanidine-HCl至终浓度不超过1M； 按Trypsin酶与底物蛋白的量之比在1：50的比例， 加入浓度为1mg/ml的Trypsin酶液，37℃孵育12Hr; 6 10％TFA终止消化。 4. SDS凝胶电泳结果 5. 凝胶处理 6. 利用质谱分析鉴定蛋白质 Mascot检索结果 NSC胞膜的某些关键蛋白质 Cytoskeleton Proteins： NEST_RAT (P21263)Nestin Neurotransmitter related protein: ADA1B_RAT (P15823)Alpha-1B adrenergic receptor (Alpha 1B-adrenoceptor) Neurofibra protein: NF1_RAT (P97526)Neurofibromin (Neurofibromatosis-related protein NF-1) NFM_RAT (P12839)Neurofilament triplet M protein (160kD neurofilament protein, Neurofilament medium polymerizer) Neural growth factor: NTRK3_RAT(Q03351)NT-3 growth factor receptor precursor (Neurotrophic tyrosine kinase receptor) Transport and signaling conduction: NOTC3_RAT (Q9R172) Neurogenic locus notch homolog protein 3 precursor (Notch 3) GP149_RAT (Q924Y8) Probable G-protein coupled receptor 149 CAC1A_RAT (P54282) Voltage-dependent P/Q-type calcium channel alpha-1A subunit KCNQ2_RAT (O88943) Potassium voltage-gated channel subfamily KQT member 2 Enzymes： HXK2_RAT (P27881) Hexokinase-2 MRCKA_RAT (O54874)Serine/threonine-protein kinase MRCK alpha MPIP1_RAT (P48965) M-phase inducer phosphatase 1 Others: NRG1_RAT(P43322)Pro-neuregulin-1, membrane-bound isoform precursor (Pro-NRG1) HD_RAT (P51111) Huntingtin (Huntington disease protein homolog) (HD protein) NSC胞浆的某些关键蛋白质 Cytoskeleton Proteins： PAXI_RAT (Q66H76) Paxillin PLEC1_RAT (P30427) Plectin 1 MAP2_RAT (P15146) Microtubule-associated protein 2 Neurotransmitter relate