运动对老年小鼠心肌bcl-2、bax基因mRNA表达影响.docVIP

运动对老年小鼠心肌bcl-2、bax基因mRNA表达影响 　　摘要：探讨运动对心肌bcl-2、bax基因表达的影响及运动与心肌衰老的关系。方法：选取40只12月龄清洁级雄性KM小鼠，随机分成10、20、40分钟运动组和老年对照组，每组10只，运动组实施12周不同的运动方案，应用RT-PCR技术分别对心肌bax和bcl-2基因表达进行测定。结果：RT-PCR检测结果显示：与老年对照组相比，10分钟运动组心肌bax基因mRNA阳性表达(率)降低而bcl-2/bax比值升高（P＜0.05）；20分钟运动组心肌bcl-2基因mRNA阳性表达（率）和bcl-2/bax比值均显著升高（P＜0.01），40分钟运动组的这些指标与老年对照组无显著性差异。结论：（1）运动对心肌bax、bcl-2基因表达的影响与负荷有关，适宜的运动可以抑制心肌bax的表达，促进心肌bcl-2基因表达，使心肌bcl-2/bax比值升高。（2）适宜的运动使心肌细胞bcl-2基因表达增强及bcl-2/bax比值优化，有利于抑制心肌细胞凋亡，促进心肌细胞存活，延缓心肌衰老。 　　关键词：衰老；运动；细胞凋亡；基因 　　中图分类号：G804文献标识码：A文章编号：1004-4590(2007)02-0066-03? 　　 　　研究表明细胞凋亡在细胞的发育、成熟、增殖、分化、存活、死亡等过程中起着重要的作用，同时也在疾病和衰老过程中也扮演着重要的角色，细胞凋亡可能导致衰老［1］。研究还表明，bcl-2基因家族与细胞凋亡有着密切的关系，在这个基因家族组群中，尤以bcl-2、bax基因的作用最为引人注目，bcl-2具有抑制细胞凋亡、延长细胞生存期的作用，bcl-2的表达有利于细胞的生存；bax的作用与bcl-2的作用相反，它是一个典型的凋亡基因，bax的表达增加导致细胞凋亡［2-4］。bax和bcl-2是在细胞凋亡过程中起关键性作用的一对功能基因，bax和bcl-2的表达水平及bcl-2/bax比值则决定细胞生存方向［5，6］，成为影响细胞生存的重要因素。近10余年来，有关运动与细胞凋亡的研究迅猛发展，这为人们探究运动损伤及运动延缓衰老的机理开辟了新的领域，令人瞩目。本文着力于运动与细胞凋亡关系的研究。我们以自然衰老昆明小鼠为实验对象，对实验小鼠采用不同强度的运动方案分组训练，通过测定实验小鼠心肌凋亡相关基因 bcl-2、bax 的表达状况，从mRNA水平（RT-PCR）研究??讨运动对凋亡相关基因表达及心肌生存状态的影响，这有利于深化运动对衰老进程影响机理的认识，具有实际意义。? 　　 　　1材料与方法? 　　 　　1.1实验动物与分组? 　　选取12月龄清洁级雄性KM小鼠40只，实验前一周每日适应性游泳10分钟，随后随机分成老年对照组、10分钟运动组、20分钟运动组和40分钟运动组，每组10只，动物由复旦大学实验动物科学部提供【SCXK（沪）2000－0002）】。? 　　 　　1.2引物序列设计和合成? 　　bcl-2和bax的cDNA序列参照NCBI GenBank数据库设计，并由上海博亚生物技术有限公司合成，见表1。? 　　 　　表1　引物序列? 　　 　　 　　1.3实验方法? 　　1.3.1运动方案? 　　运动形式：游泳。? 　　10分钟运动组和20分钟运动组的运动时间分别为10分钟和20分钟，40分钟运动组的运动时间：第1、2周为20分钟、第3、4周为30分钟、第5－12周为40分钟，每日运动1次，每周运动5天，实验时程为12周。? 　　1.3.2 RT-PCR? 　　Bax和bcl-2基因的mRNA表达采用RT-PCR技术进行检测。? 　　取心肌一份，经匀浆、分离、沉淀、洗涤与保存抽取上述组织RNA，依次进行RNA检测、逆转录反应、PCR扩增（反应条件是：94℃预变性5min；94℃ 30sec，65℃ 30sec，72℃ 30sec，完成30个循环；72℃延伸7min。）、电泳及成像分析。? 　　 　　1.4统计学处理? 　　结果判定：阳性与阴性。所有结果均经χ2检验。? 　　 　　2结果? 　　 　　RT-PCR检测结果：? 　　心肌bax基因mRNA阳性表达和阳性表达率为：老年对照组7例（87.5％）、10、20和40分钟运动组分别为5例（71％）、6例（75％）和6例（75％）；心肌bcl-2基因mRNA阳性表达和阳性表达率为：老年对照组4例（50％）、10、20和40分钟运动组分别为4例（57％）、6例（75％）和4例（50％）。? 　　与老年对照组相比，10分钟运动组心肌bax基因mRNA阳性表达(率)降低而bcl-2/bax比值升高（P＜0.05）；20分钟运动组心肌bcl-2基