连云港地区妇女子宫颈脱落细胞HPVDNA亚型检测与分析.docVIP

连云港地区妇女子宫颈脱落细胞HPVDNA亚型检测与分析 　　[摘要] 目的:了解连云港地区不同HPV亚型的分布情况,以及不同亚型引起宫颈癌的风险度;方法:采用凯普快速导流杂交技术对1699名已有性生活的门诊和体检妇女进行21种HPV亚型分型检测,对其中98名高危亚型携带者行TCT检查和阴道镜下取组织进行活检;结果:1699名受检者,检出率12.83%有17种亚型被检测出来,排在前五位的亚型感染率从高到低依次为HPV58、52、16、33、18分别为22.0%、13.3%、13.3%、11..5%和10.1%。进行TCT细胞学和组织病理学检查发现了2例原位癌和2例LSIL癌前病变患者;结论:连云港地区HPV亚型感染分布以58、52和16型为主,且3种亚型的分布与癌前病变及宫颈癌具有密切的相关性。 　　[关键词] HPV;凯普快速导流杂交;癌变 　　 　　宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,其发病的位置位于子宫的开口部位―子宫颈的内壁,发病率在女性恶性肿瘤中居第二位,仅次于乳腺癌[1]。据世界范围内统计,每年大约有46.6万左右的宫颈癌新发病例,占所有癌症新发病例的5%,其中80%的病例发现发生在发展中国家[2]。所以提早预防、诊断和治疗子宫颈癌就成为了维护妇女健康的首要问题。 　　宫颈癌与HPV病毒的关联: 　　人乳头状瘤病毒与宫颈癌关系密切,宫颈癌是妇女第二大致死癌病,临床证明95-99.7%的宫颈癌病例和高危型HPV病毒感染有关。于1977年Laverty在电镜中观察到宫颈活检组织中存在人乳头状瘤病毒颗粒,以及ZurHausen提出HPV与宫颈癌发病相关联的假设后,国内外学者对此问题进行了大量的研究,最终在1995年的IARC专题讨论会上通过HPV感染是宫颈癌的重要原因,即HPV感染是宫颈癌发生的先决必要引发条件。HPV可分为高危型和低危型两种[3],长期持续感染高危型可以致癌,危害生命。低危型HPV可导致生殖器尖锐湿疣,影响生活质量。同时,有一定比例的低危型感染还伴有高危型混合感染。因此,临床尖锐湿疣患者进行高危及低危HPV病毒检测非常重要。高危型HPV导致癌病的机会较高,科学研究发现至少有20种高危型HPV与95%的早期浸润和浸润性子宫颈癌有关。HPV感染,特别是高危型HPV感染,与宫颈癌的发生存在明确关系。从近期在欧洲及其它各地的人群随意HPV筛选结果证实,HPV可以在99.8%的宫颈癌患者???中发现。 　　本研究利用导流杂交法,采用反斑点杂交技术进行检测,该方法可同时检测21种HPV型别,包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等13种高危型,6、11、42、43、44等5种低危型和53、66、CP8304等3种中国人常见的亚型。本研究的目的是了解连云港地区妇女HPV感染率及型别分布情况。 　　一、对象和方法 　　1.样本来源:1699例受检者为2007年12月至2009年1月期间在连云港市中医院和连云港市妇幼保健医院这两家医院的妇科门诊就诊和进行正常身体体检的年龄在18-60岁的自愿接受生殖道HPV感染筛查有性生活的妇女,该人群包括医务人员、教师、公务员、居民、服务员等,受检对象均无宫颈锥切和子宫切除史,未参加过HPV的检测。 　　2.取材:要求在非月经期采样,采样前3天内不用阴道栓剂,前1天起禁止性生活。取材前先用消毒棉拭子将宫颈口的分泌物擦去,然后用凯普公司专用的宫颈刷沿顺时针旋转3周取出,放入3ml专用细胞保存液中,立即送检或放置4℃冰箱中,一周内检验。 　　3.方法: 　　采用凯普快速导流杂交技术可以一次检测6、11、42、43、44、16、48、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304等21种HPV基因型,整个实验过程如下: 　　（1）样本DNA提取:取样本0.5ml,14000r/min离心10分钟,弃去上清液,用凯普公司的试剂盒抽提DNA;（2）PCR扩增:将PCR反应试剂及DNATaq酶按比例混合后在每个反应管加入24ul,再加入DNA模板1ul,混合后进行PCR扩增,每一批次同时扩增HPV18阳性对照和阴性对照各一个;（3）快速导流杂交:采用凯普医用核酸分子快速杂交仪及配套试剂盒,在杂交平台上放入标记有特异性寡核苷酸探针的低密度基因芯片,一次同时检测15个样本,按试剂盒说明进行导流杂交,酶标显色;（4）结果判断:肉眼观察检测结果,阳性点呈现紫色圆点,根据芯片上HPV分型分布相应的点判断HPV亚型,每一张芯片分布有PCR反应质控点（IC）和杂交显色质控点（Biotin）. 　　二、结果 　　在所检测的1699份样本中,阳性样本218份,阳性率为12.83%（218/1699）,在2