古细菌视紫红质卵白的质子泵机理及其与聚合物复合功能材料的研究.pdf

顾l是雾博士论文 摘要 摘要 二十一世纪是学科交叉的世纪，是生物、信息和材料等领域相互交融的世 纪。本论文研究两种膜蛋白——细菌视紫红质(BR)和古紫质4(AR4)质予 泵机理的区别和联系，运用基因工程点突变的技术对两种膜蛋白进行改性，深 入考察氨基酸序列和脂环境对它们质子泵功能及光循环性质的影响，并将这种 具有生物活性的生命物质和具有良好加工性能的聚合物材料相结合制备成为功 能复合材料。本课题涉及了高分子材料科学、生命科学以及信息科学领域。 膜蛋白具有十分重要的生物功能，生命的基本单位——细胞与外界环境的 能量转换、信息识别与传递、物质运送等基本生命过程主要通过其生物膜上的 膜蛋白来完成。在过去的三十年罩面，很少有单个的生物体能够像BR膜蛋白 这样引起人们如此广泛的兴趣。人们相信这个简单的含有视黄醛的质子泵能够 帮助我们开启离子泵机理奥秘之门，也看到了这种神奇的蛋白在应用上的巨大 潜力。AR4蛋白是从在我国西藏盐湖中发现的一种嗜盐菌株中提取的含有视黄 醛的膜蛋白，它与BR蛋白一群具有光驱质子泵功能。但与BR相比，AR4结 构与功能的神秘面纱还未为世人所揭开，还需要我们进行不断地探索研究。 BR蛋白是最早有技术应用的光至变色的生物分子之一，而BR／聚合物功能 复合材料的制备是决定其应用前景的最为关键的技术之一。如何将AR4蛋白也 应用于高级防伪和光信息存储与处理领域也是‘个挑战性课题。 基于此，本论文的主要创造性工作和成果为： (一)研究了AR4蛋白的光循环性质和质子泵机理，提出弱偶联模型解释 AR4的特殊现象。在与BR相比较的基础上，考察了AR4质子泵功能和光循环 性质的pH依赖性，测定了其几个关键氨基酸在光循环中各个状态的p墨值，发 现在高pH区域，AR4蛋白光循环中的质子提取与释放顺序发生反向，从而与 BR蛋白在中性pH环境中的顺序一致。指出AR4光循环中，Asp85质子化与蛋 白质子释放之间的弱偶联效应是导致AR4与BR蛋白光循环中相反的质子提取 和释放顺序的原因。同时，还发现mH中质子释放基团并没有失去功能，而是 ．IV． 棋l七摹博士论文 摘要 在催化质予受体Asp85的去质子化、加速AR4光循环最后过程中质子在质子释 放通道内部的传递和AR4初念的回复上发挥了重要的作用。与BR相比，AR4 是一个碱化了的质予泵。 (二)研究了去垢剂Tritonx一100对AR4蛋白质子泵功能的影响，发现蛋 x．100 白质的自组装聚集状念对于AR4的质子泵功能有重要影响。发现Triton x一100后，AR4蛋白的这种质子提取与释放顺序还可以得到恢复。表明脂与蛋 白的相互作用及蛋白质的聚集状态在影响AR4中的ASp85质子化与质子释放之 间的偶联作用，以及调节其光循环中质子泵次序方面起到了重要的作用。 (三)研究了转基因AR4蛋白与野生AR4及BR蛋白质子泵功能的差异。 通过合作研究，将AR4和BR基因在一株本身不合成菌紫质和玉红素的嗜盐菌 株”3中克隆和表达，本论文发现：在L33中表达的AR4蛋白(称为转基因 AR4蛋白)表现出与野生AR4蛋白以及BR蛋白都不相同的光循环和质子泵性 质，其Asp85质子化与质子释放之间的偶联作用以及其他很多性质都介于野生 AR4和BR之间。转基因AR4与BR蛋白具有相同的脂环境，其性质的差异由 其不同的氨基酸序列所导致；而转基因AR4与野生AR4蛋白具有相同的氨基 酸序列，其性质的差异归咎于其所不同的脂环境(转基因AR4的紫膜环境和野 生AR4的紫红膜环境)。因此，我们提出AR4蛋白中一些特殊的氨基酸残基和 其特殊的脂环境共同决定了其在光循环中与BR相反的质子提取与释放顺序。 AR4．D212G的质子泵功能和光循环性质，同时将野生BR、D96NBR和野生 BR 个非常疏水的氨基酸val(v)，并没有影响到BR蛋白基本的折叠结构，D9