黄花蒿Dbr2基因分离与诱导表达特性分析.docVIP

黄花蒿Dbr2基因分离与诱导表达特性分析 　　【摘 要】目的：从黄花蒿中分离鉴定青蒿素生物合成途径关键酶――青蒿醛双键还原编码基因（Dbr2）并研究其表达特性，藉此探索提高该基因表达量并进一步促进青蒿素合成的途径。方法：采用PCR法从黄花蒿总RNA中分离Dbr2基因编码序列，并采用实时荧光定量PCR法定量检测Dbr2基因在多种人工模拟环境中的转录表达模式。结果：从黄花蒿中分离出1179bp的Dbr2基因编码序列。经过低温、紫外辐射、淹水、脱水、复水、真菌诱激子、葡萄糖、水杨酸处理，Dbr2 mRNA水平分别提高2.5、3.7、10.8、6.0、34.5、28.7、6.3和8.5倍。结论：黄花蒿Dbr2基因可能具有环境诱导表达特性。 　　【关键词】黄花蒿；Dbr2；青蒿素；诱导表达 　　 　　青蒿素及其衍生物已成为最重要的一线抗疟药，黄花蒿（Artemisia annua L.）是目前发现的唯一能合成青蒿素的天然植物，但产量很低，仅为0.01-0.8%左右。近年，青蒿素代谢工程研究取得突破性进展，多个相关的关键酶基因相继被克隆。Covello研究团队在黄花蒿腺毛中发现一种类属于烯醇还原酶家族的蛋白催化青蒿醛C11-C13位的还原反应，并将其命名为青蒿醛#61508;11（13）双键还原酶。在酵母中同步表达其编码基因（Dbr2）和其他青蒿素合成基因――法呢基焦磷酸合酶、紫穗槐