外源性金属离子对原代培养的成骨细胞增殖、分化及矿化功效的影响.pdfVIP

摘 要 摘 要 本实验采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法，碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定、油红 O 染 色及定量测定、茜素红染色及定量测定等方法研究了不同浓度金属离子(Fe3+ ，Fe2+ ；Cu2+ ， + 3+ 3+ Cu ；Pr ，Gd )对原代培养小鼠成骨细胞增殖、分化及矿化功能表达的影响以及混合 金属离子(Zn2+/Ca2+/Mn2+)对朝鲜淫羊藿苷及总黄酮预防骨质疏松的影响。结果表明： -9 -4 3+ 2+ -3 3+ 2+ 1. 1×10 ~1×10 mol/L 的Fe 和 Fe 促进细胞增殖，1×10 mol/L 的Fe 和 Fe 抑制 细胞增殖。对 ALP 活力却多表现为抑制。Fe3+抑制成骨细胞向脂肪细胞的分化；Fe2+在 -6 -5 低浓度下促进成脂分化，随作用浓度升高促进作用减弱，浓度为 1×10 和 1×10 mol/L -4 时表现为抑制作用；之后作用浓度继续增加到 1×10 mol/L ，抑制作用减弱，甚至转为 促进。对矿化结节的形成 Fe3+和 Fe2+则表现出相反的趋势。 2+ + 2. Cu 和 Cu 对成骨细胞增殖及分化的影响较复杂，与离子浓度及作用时间有关。 2+ + -7 2+ 所有检测浓度下，Cu 和 Cu 促进成骨细胞向脂肪细胞的分化。除 1×10 mol/L 的Cu 2+ + 显著促进成骨细胞矿化结节的形成，其他检测浓度的 Cu 和 Cu 或抑制或不影响成骨细 胞矿化结节的形成。 3. 稀土离子 Pr3+和 Gd3+ 降低成骨细胞存活率，高浓度时存活率提高，且与作用时 间有密切关系。对 ALP 活力的影响与浓度及作用时间有关。矿化结节的形成率则随浓 度升高先降低后升高，作用 17 d 后 Pr3+促进结节形成，作用至 21 d 时促进作用不明显； -4 3+ 3+ 1×10 mol/L 的Gd 促进结节形成，其余浓度的 Gd 最表现为抑制作用，随作用时间延 长影响减弱。Pr3+和 Gd3+均促进成脂分化，且存在一定的浓度依赖性。 4. 混合金属离子(Zn2+/Ca2+/Mn2+)与朝鲜淫羊藿苷及总黄酮合用可不同程度影响后 者生物效应的发挥(协同或拮抗作用) 。这种效应可能通过形成黄酮金属络合物而产生。 实验结果表明：离子种类、离子价态、离子作用浓度及作用时间均是影响不同金属 离子生物效应转变( 由毒性到活性，下调到上调，损伤到保护) 的关键因素。我们推断金 属离子的不同的电子排布通过影响其配位形式，以不同的方式与成骨相关蛋白及各种转 录调节因子作用，进而影响骨代谢。 关键词 外源性金属 成骨细胞 增殖 分化 矿化 Ⅰ Abstract Abstract By using methods of 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium