应用带有阳离子辨认基因的辅助辨认聚合物链进行蛋白质印迹的研究.pdfVIP

摘要 摘要 分子印迹技术是一种模拟抗体一抗原相互作用的人工生物模板技术，可以 针对不同的目的，采用人工合成的方法，构建出具有特定选择性识别位点的印 迹聚合物。除了小分子外，蛋白质也可以作为印迹的模板。在以前的研究工作 中我们提出了一种印迹蛋白质的新方法，并且分别引入了带有羧基和吡啶识别 基团的辅助识别聚合物链，以克隆蛋白质为模板，以能提供大表面积的大孔树 脂为载体，合成蛋白质印迹聚合物，用于从细胞提取液中吸附分离天然的目标 蛋白质，有很好的富集效果。 在本工作中，我们引入带阳离子识别基团的辅助识别聚合物链，识别基团 定为氨基，聚合物主链为限长的聚乙烯醇。实验首先通过乙酸乙烯酯自由基聚 合经醇解后制得聚合度约为40的聚乙烯醇，然后对聚乙烯醇骨架进行修饰， 使其带上随机分布的氨基基团和双键基团。然后我们的识别分子再与模板蛋 白质猪亲坏素18(pCyPl8)进行自组装，组装体通过其上的双键键合基团 与第二单体丙烯酰胺以聚乙烯醇大孔树脂球作载体进行交联聚合，辅助识别 链上的氨基作为识别基团与模板蛋白质作用。实验使用500mM氯化钾缓冲 溶液除去模板蛋白pCyPl8和未聚合的识别分子后得到水溶性极好的蛋白质 印迹树脂PIPpl8，再用此印迹聚合物从细胞提取液中吸附天然微量蛋白质，显 示出了很好的富集效果。为了证明我们合成的辅助识别聚合物链是具有普适性 的，我们又以较大分子量的牛血清白蛋白(BSA)为模板，以同样方法制备了BSA 的蛋白质印迹树脂PIPBsA。柱分析结果表明，我们的辅助识别聚合物链对于较 大分子量目标蛋白的分离纯化也是十分有效的。 研究结果证明，我们合成的带正电荷的蛋白质印迹聚合物无论是用于直 接吸附目的蛋白还是作为柱材料用于色谱分离目的蛋白都具有良好的效果， 并且是一种广谱的方法。 关键词：分子印迹辅助识别聚合物链蛋白质印迹聚合物分子印迹聚 合物识别分子 Abstract Abstract Molecular creates sites template imprinting,whichspecificrecognitionbyusing akindofartificialsimulationof interaction．Besides molecules，is antibody-antigen small alsocanbeusedas work，we molecules，proteins templates．Inprevious anewmethodfor with theassistant reported proteinimprintingimmobilizing chainson shows good recognitionpolymer polymericmicrospheres，which andis forthe of fromthe recognitionspecificityapplicableadsorptiontargetprotein ofmixed system proteins． with workwe theassistant chains Inthis synthesized recognitionpolymer randomly amido