医学PPT课件大全抗体芯片.ppt

05级生物技术３班 金　波 蛋白组学研究是即基因组学研究后的生命科学发展的一个大方向之一。蛋白质的结构和功能最终直接影响着生命活动的变化，基因转录水平的研究只能在一定程度上反映基因表达产物的变化，而真正发挥功能的蛋白要经过转录后加工、翻译调控以及翻译后加工等许多步骤和调控才能形成，因而对蛋白质的直接研究才能真实的解释各种生命现象。但是目前研究蛋白质的手段和方法还没有很大的发展，所以寻找有效、快捷的蛋白分析技术成为了至关重要的一个环节。 　　 蛋白芯片技术的出现给蛋白组学研究带来新思路。蛋白组学研究中一个主要的内容就是要研究在不同生理状态或病理状态下蛋白水平的量变，微型化，集成化，高通量化的抗体芯片就是一个非常好的研究工具，它也是蛋白芯片中发展最快的芯片，而且在技术上已经日益成熟。这些抗体芯片有的已经在向临床应用上发展，比如肿瘤标志物抗体芯片等，还有很多已经用在研究的各个领域里。 抗体芯片是最近发展起来的一种技术，可以同时检测几百种蛋白质表达水平；也可以用来研究蛋白质翻译后加工(磷酸化水平改变)或者研究蛋白质间相互作用。其原理是：大量不同的抗体按照预定的顺序排列并固定在固体支持物上且保留其抗原结合能力，制成抗体芯片膜，芯片膜与蛋白质样品一起孵育，在温育过程中芯片膜识别并捕捉抗原，通过化学发光方法对抗原以及与抗原相连的蛋白质进行研究 Ab Microarray 380上抗体是经过精心挑选的，这些抗体不仅可以识别人源的蛋白，对小鼠和大鼠样品同样有效。另外，每个抗体的结合亲和力都经过了实验测定，从多种抗体来源的克隆中筛选出反应特异性好，交叉反应程度小，信号明显的抗体，并且还要保证信号与抗原浓度有着良好的线性关系。优化的抗体探针才可以保证反应的特异和灵敏（可检测20pg/ml的抗原浓度）。芯片的检测是用荧光报告分子，常用的荧光扫描仪都能够完成。 　 Ab Microarray 380抗体芯片并不要求特殊的实验操作，只要一般常规的操作就可以完成以往极为复杂耗时的工作。整个操作流程包括：从50—200mg组织或细胞、体液中进行蛋白质抽提——用Cy5和Cy3两种不同颜色的荧光分子分别标记两个样品——洗去多余的标记分子——与芯片杂交孵育——扫描分析结果。整个过程从样品制备到结果分析只要一天即可完成，你只要准备好样品、荧光染料、脱盐纯化柱（处理体液样品时用）和荧光扫描仪，其他的试剂全部由试剂盒提供。 细胞周期调控、细胞结构、凋亡和神经生物学等广泛的生物功能的相关蛋白，跨度大、适用范围广。 * 芯片上的抗体分别经过特异性抗原、细胞系和组织的检测，灵敏度高. * 开放性的芯片平台设计，可以用各种型号DNA芯片荧光扫描仪进行检测。 还有一点值得注意,由于抗体抗原结合的差异、标记差异等原因，根据芯片结果信号的强弱判断同一样品中两种不同蛋白的多少是不恰当的。 A：蛋白质相互作用的检测当发现一种新的基因时，需要知道这个基因和它编码的蛋白在细胞中起什么作用，这时需要确定此基因编码的蛋白在信号通路中的作用，抗体芯片AntibodyArraysTM 提供了一种非常经济实惠且操作快速的方法，使用抗体芯片可快速筛选出此编码蛋白和信号通路中其它蛋白的相互作用。抗体芯片筛选方法具有以下优点：实验周期短；耗费低；假阳性率非常低；操作简便一般实验室均很容易完成。 B:蛋白质磷酸化的检测某制药公司研究人员，她领导的小组已经发现了某一化学物质作用的靶点，但是她需要了解这些化学物质是否对其它蛋白有影响，这样她才可以知道药物的选择性和毒性如何。她选择使用AntibodyArraysTM 来进行评估，比较了药物处理和没有处理的细胞蛋白质磷酸化水平的改变，由此对该化学药物的专一性有了进一步了解。使用AntibodyArraysTM研究者可以快速得到关于哪些蛋白质已磷酸化（活性变化）的信息，这样便可以确定下一步研究目标。 * * 第一张商品化的抗体芯片是由美国BD Clontech公司推出的。这是一张用于研究的抗体芯片，芯片上排列了378种已知蛋白的单抗（Ab Microarray 380， 目录号 K1847-1），这些单抗对应的蛋白都是细胞结构和功能上十分重要的蛋白，涉及信号传导、肿瘤、细胞周期调控、细胞结构、细胞凋亡和神经生物学等广泛的领域。通过这张芯片，我们在一次实验中就能够比较几百种蛋白的表达变化。 芯片上抗体的选择不但根据其特异性，也根据抗体的结合亲和力，在验证实验中特异性低、交叉反应高、或者信号强度低的抗体都被排除，另外所有抗体都经过检验保证得到的信号与抗原浓度有良好的线性相关，那些没有良好的线性剂量关系的抗体都被排除。因此抗体芯片能够检测到样品中很低的pg/ml浓度的抗原。 * 整个