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Enzyme Engineering酶工程 第十章 同工酶与气体酶学 第一节 同工酶的基础知识 第二节 同工酶的应用 第三节 固氮酶的作用 第四节 甲烷加氧酶的作用 第五节 氧化CO的酶 第一节 同工酶的基础知识 一．概念：指同一种酶的多种分子形式。这些不 同的分子形式具有相同或相似的底物，催化 相同的反应 二．分类 单基因决定的同工酶 多基因决定的同工酶 复等位基因基因决定的同工酶 修饰同工酶 三．同工酶的结构基础 同工酶的一级结构的差异 构象变化造成同工酶的差异 四．同工酶的常用分离和测定方法 （一） 方法 1 电泳 2 层析 3 热稳定性 4 动力学 5 免疫法 （二） 方法使用注意点 1．严格控制可能影响实验的条件，重复实验。 2．尽量消除由环境造成的差异。 3．增大实验的样本数量及样本随机性，使之具有代表性。 4．实验条件标准化，减少人为操作造成的误差 5．基本酶谱与分析方法的标准化。 6．选择尽可能多的酶进行分析。 第一节结束 点击返回 第二节 同工酶的应用 一 植物系统学研究中的应用 （一）原理：同工酶在不同的物种、同一物种的不同时期、同一时期的不同器官、同一器官的不同组织中都具有特异性，既是生理指标，又是可靠的遗传物质表达产物。 （二）应用领域 1 ．同工酶在栽培粮食作物（水稻、玉米、小麦、荞麦）起源和演化中的作用 2．同工酶在中药材起源和演化中的作用 3．同工酶在果树起源和演化中的作用 4．同工酶技术在十字花科作物育种上的应 第二节结束 点击返回 第三节 固氮酶的作用 一．固氮酶的研究历史 二．固氮酶的研究热点 生物固氮研究正在分子和原子水平上开展 二．固氮酶的研究热点 1．固氮基因表达的氨阻遏和氧敏感机制 2．共生结瘤固氮中植物与微生物相互关系的基因表达和调控 3．根瘤菌结瘤因子的结构和生物合成 4．根瘤菌及其宿主植物的基因组学转录组学和蛋白质组学 5．固氮酶的结构和功能及其化学模拟 三．固氮酶的酶学简介 1．种类：一种是钼铁蛋白，另一种是铁蛋白 2．催化的反应 钼蛋白和铁蛋白比较 3．固氮酶的结构 4 固氮酶的应用 （1） 农业中：固氮肥料的研究 （2） 生物制氢技术中的应用 光合生物产氢 能够产氢的光合生物包括光合细菌和藻类。 光合细菌属于原核生物，催化光合细菌产氢的酶主要是固氮酶。 第三节结束 点击返回 第四节 甲烷加氧酶的作用 一．概念 甲烷单加氧酶是甲烷利用细菌(methanotrophic bacteria)代谢过程中的重要酶系，在细菌细胞内直接利用分子氧作为底物催化甲烷氧化成甲醇。 二．酶的性质 1．甲烷利用细菌的分类和表现形态 可根据所利用碳源和能源不同将甲烷利用细菌分成： 专性甲烷利用细菌 兼性甲烷利用细菌 拟甲烷利用细菌 2．酶的组成 组分A为245KD左右的羟基化酶； 组分B为15KD左右的调节蛋白； 组分C为分子量为40KD左右的还原酶 3．活性中心 羟基化酶是一个由三种亚基组成的二聚体蛋白 什么是MMOB? 第四节结束 点击返回 第五节 氧化CO的酶 一．羧基养细菌的CO脱氢酶 二．硫酸盐还原细菌的CO脱氢酶 三．光养厌氧菌的CO脱氢酶 四．甲烷养细菌的甲烷单加氧酶 第五节结束 点击返回 * *