2014生物二轮专题8第1讲 基因工程和克隆技术课件.ppt

第1讲　基因工程和克隆技术 考纲点击　1.基因工程的诞生(Ⅰ)。2.基因工程的原理和技术(Ⅱ)。　3.基因工程的应用(Ⅰ)。4.植物的克隆(Ⅰ)。5.动物的克隆(Ⅰ)。;思维激活 1．基因工程和克隆技术涉及哪些工具酶？ 提示：基因工程的工具酶是限制性核酸内切酶和DNA连接酶，克隆技术的工具酶是纤维素酶、果胶酶、胰蛋白酶。 2．限制性核酸内切酶、DNA连接酶、载体的化学本质一样吗？DNA连接酶和DNA聚合酶有怎样的区别？ 提示：不一样。限制性核酸内切酶和DNA连接酶的化学本质是蛋白质，载体的化学本质是核酸。DNA连接酶连接两个DNA片段，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。;3．细胞株与细胞系有何本质区别或联系？ 提示：细胞系是泛指可传代的细胞，细胞株是具有特殊性质的细胞系。;自查 1．基因工程的核心是 。 2．基因工程的三种工具是： 、 及 ，如质粒。 3．基因工程发展史上第一个成功的实验是培养出了同时具有 性状的大肠杆菌，这标志着基因工程的诞生。 4．获得目的基因通常有两种办法，即针对目的基因序列已知者，可用 ；若基因序列未知者，则需 。;5．用 酶和 酶水解细胞壁，可以获得分离的植物细胞原生质体。 6．细胞克隆的基本要求是：必须保证分离出来的细胞是 。 7．提高细胞克隆形成率的措施包括选择适宜的培养基、添加 ，以 细胞支持生长， 刺激，使用 调节pH等。;10．一般血清中的抗体是一群识别不同抗原部位的抗体混合物，单抗则识别抗原分子的特殊部位，具专一性。(　　) 答案　1.×　2.×　3.√　4.×　5.×　6.×　7.× 8．×　9.√　10.√;必考点一　基因工程 【典例1】 浙江大学农学院喻景权教授课题组研究发现，一种植物激素——油菜素内酯能促进农药在植物体内的降解和代谢。用油菜素内酯处理后，许多参与农药降解的基因(如P450基因和红霉素抗性基因)表达和酶活性都得到提高，在这些基因“指导”下合成的蛋白酶能把农药逐渐转化为水溶性物质或低毒甚至无毒物质，有的则被直接排出体外。某课题组进一步进行了如下的实验操作，请回答下面的问题。;解析　进行基因工程操作时，首先要获取目的基因，其方法有多种：从基因文库中获取、人工合成目的基因或PCR合成等。在构建基因表达载体的过程中，用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。图中的受体细胞是细菌，故用转化法导入表达载体，导入后，需检验和筛选。从图中可以看出，最终是通过对照实验来检验转基因细菌对土壤中残留农药的分解能力。 答案　(1)从基因文库中获取　人工合成目的基因或PCR合成　耐热的DNA聚合酶　限制酶和DNA连接酶 (2)转化法　氯化钙溶液 (3)红霉素抗性基因　红霉素　(4)油菜素内酯能否促进土壤中农药的分解;【归纳提炼】 1．目的基因的获取途径 (1) ：从自然界已有的物种中分离，如从基因文库中获取。 (2)人工合成目的基因 常用方法有：①化学合成法：已知核苷酸序列的 基因，直接利用 用化学方法合成， (需要，不需要)模板。②人工合成法：以 为模板，在 作用下人工合成。③利用 技术获得。;2．将目的基因导入受体细胞;3.目的基因的检测和表达;4．重组DNA分子的构建 (1)重组DNA分子的构建过程;(2)从“基因表达”层面理解基因表达载体的必需元件 ①重组DNA分子的组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因＋复制原点。 ②启动子和终止子：启动子是RNA聚合酶结合位点，启动转录；终止子是终止转录的位点。插入的目的基因只是结构基因部分，其表达需要调控