蛋白质组学新技术PPT.ppt

第一向：聚焦参数设置 根据胶条的pH梯度范围、胶条长度及上样量来确定聚焦参数。一般是先主动水化，以24cm pH 3-11 NL的胶条举例，参数设置如下： 30v， 12hr； step 100v，1hr； gradient 1000v，1hr； gradient 8000v，2hr； Step 8000v，50kvhr； step 500v，10hr。 等电聚焦流程图 第二向SDSSDS电泳由四步骤组成： 1) 灌胶 2) 在SDS 平衡缓冲液中平衡胶条 3) 将平衡好的胶条放置在SDS 凝胶上 4)第二向电泳系统的准备并进行电泳 样品制备原则 样品制备是双向电泳中最关键的一步，质量的好坏将直接影响2-DE结果。尽管处理方法多种多样，但都遵循几个基本的原则： 1）尽可能的提高样品蛋白的溶解度，抽提最 大量的总蛋白，减少蛋白质的损失； 2）减少对蛋白质的人为修饰； 3）破坏蛋白质与其他生物大分子的相互作 用，并使蛋白质处于完全变性状态。 样品制备需要的试剂 样品制备需要四种主要的试剂： 1.离液