抗生素精品课件抗生素微生物检定法.ppt

第五模块 生物检测技术 第八章　 抗生素微生物检定法 学习目标 掌握抗生素微生物检定法的基本原理；理解浊度法的测定原理；掌握管碟法二剂量法的具体操作步骤及相关注意事项 能使用管碟法对药物进行效价测定 复习提问 液相色谱定性、定量方法 要有哪几种？ 新课大纲 第一节 抗生素微生物检定法 一、概 述 －－系指在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法，能够直观地反应抗生素总的抗菌能力。 本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。 特点：灵敏度高、用量少、专属性不强 指抗生素药物的作用强度。 用单位“IU”作为其有效成分的一总衡量尺度。 目前，抗生素的剂量原则上以纯品的重量表示，并加注单位。如土霉素0．25克（250000单位） 即1毫克=1000单位 ； 个别品种仍以习惯沿用，如青霉素仍用单位表示剂量。 三、管碟法 本课小结 * 学习目标 复习提问 新课大纲 新课内容 本课小结 课后习题 * 技能目标 知识目标 1. 2. 3. 液相色谱法流程。 液相色谱法定性和定量依据。 一、概述 二、标准品及效价 三、管碟法 抗生素微生物检定法 是指当标准品和供试品属于同一性质的抗生素时，标准品溶液和供试品溶液对一定试验菌所得的剂量反应曲线，在一定剂量范围内相互平行。即“同种物质，同种反应”，因此每种抗生素有着各自的效价单位，不同抗生素之间的效价单位没有可比性。 量反应平行线原理 3.方法分类: 扩散法 浊度法 稀释法 分为： 国际通用法定方法: 扩散法中的管碟法 ①管碟法又称管碟琼脂扩散法 是利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品二者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。在一定范围内，抗生素溶液的对数浓度（剂量）与抑菌圈面积或直径成正比，根据抑菌圈的大小计算出抗生素溶液的浓度。 管碟法分为三种方法　一剂量法又称标准曲线法，常用于原料生产的过程监控、中间体或半成品检验；二剂量法是抗生素质量检验的常规方法；三剂量法主要用于标准品的标定。中国兽药典（2005年版）收载了二剂量法和三剂量法。 ②浊度法　系利用抗生素在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品效价的一种方法。 二、抗生素标准品及效价单位 定义:标准物质 国家与国际标准品 标准品的基本要求 使用保存 抗生素效价单位:单组份和多组分 抗菌效价： T2 S1 S2 T1 扩散现象：由球面扩散动力学公式表示　 相当于直线方程：y=bX+c 抗生素总量的对数值与所形成抑菌圈直径的大小呈直线关系，来测定抗生素抗菌活性。 1.理论依据： 2.影响因素? 　　　　　 　　　　　　 　　　 Ⅰ超净工作台 Ⅲ双碟 Ⅱ抑菌圈测量仪 Ⅴ钢管 Ⅳ陶瓦盖 Ⅵ恒温培养箱 Ⅷ玻璃仪器 Ⅸ游标卡尺 Ⅹ缓冲液 Ⅺ培养基 Ⅻ试验菌 Ⅶ灭菌刻度吸管 3.仪器用 具材料 抑菌圈（抗生素效价）自动测量分析仪 ③菌 悬液 的制 备 ⑦检定法 ④标准品溶 液的制备 ⑤供试品溶 液的制备 ⑥双碟的制备 ②灭菌 缓冲溶液 ①培养基及 其制备方法 4.测定 方法 PH 培养基 实验菌 类别 6.5-6.6 7.8-8.0 滕黄八叠球菌 枯草芽胞杆菌 Ⅱ 四、土氯、林 Ⅰ 链、卡庆、红 水 1000ml 磷酸二氢 钾 1.32g 磷酸氢二 钾3.68g 氯化钠 3.sg 酵母浸 出粉3g　 胨5g 牛肉浸 出粉 1.5g 葡萄糖 1g 培养基 ①培养基及 其制备方法 除葡萄糖外，混合上述成分，加热溶化后滤过，加葡萄糖溶解后，摇匀，调节P值 使灭菌后为7．0～7．2，在115oC灭菌3分钟，即得。 磷酸盐缓冲液（ PH 6.0）取磷酸氢 二钾 2g 与磷酸二氢钾 8 g，加水使成 1000 ml，滤过，在115oC灭菌30分钟，即得。 磷酸盐缓冲液（pH7.8）取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使成1000ml，滤过，在 115 oC灭菌 3 0分钟，即得。 ②灭菌缓冲液 枯草芽抱杆菌悬液　　取枯草芽抱杆菌（63501）的普通琼脂斜面培养物，接种于盛有普通琼脂斜面培养基的培养瓶中，在35－37oC培养7日，用革兰氏染色法涂片