afm使用与应用探究by杜恺.pptVIP

AFM的使用与应用探究 杜恺 06300190003 Contents AFM基本原理 实验操作与标准样品 实验操作与标准样品 实验操作与标准样品 实验操作与标准样品 应用探究：扫描血红蛋白结构 应用探究：扫描血红蛋白结构 应用探究：扫描血红蛋白结构 问题与讨论 问题与讨论 应用探究：扫描血红蛋白结构 结语 * * Company LOGO 实验操作与标准样品 2 问题与讨论 4 AFM基本原理 3 1 应用探究：扫描血红蛋白结构 3 3 激光反射式（扭矩测微） 1.探针感应片的安装（万事开头难） 2.进针（细心操作） 3.调节信号波形水平 （注意清洁样品表面，吹干样品，样品表面有水汽时将无法完全调平） 一维标准样品 二维方格样品 二维圆形样品 扫描范围和分辨率： X-Y 最大扫描范围：60-80um Z 方向最大范围：20um XY 平面分辨率：1.7nm 恒力模式扫描，20nN AFM应用： 可扫描纳米尺度上不导电的，可承受一定应力（nN量级）反馈的物质表面结构 血红蛋白（分子量64000）是由二条α链和二条β链和四分子亚铁血红素组成 尺度同样是在纳米量级上 试想：是否可以通过AFM扫描血红蛋白的结构，从而直接观测研究其与氧的结合位点、携氧状况、携带一氧化碳的状况等诸多有实际指导意义的过程 颗粒状的血红蛋白干粉 困难与挑战：直接对干粉样品进行扫描 1.血红蛋白样品颗粒分散，且不均匀，不易找寻进针位置。扫描的可能是杂乱重叠的蛋白结构 2.样品质量较轻，稳定性不佳，易受环境干扰，进针扫描时可能会带动样品产生位移 3.血红蛋白干粉较软，有可能应力不足，扫描时可能会有一定的形变 设想的解决方案： 1.试剂溶解血红蛋白，均匀涂抹在载玻片，吹干析出后扫描，提供均匀的蛋白层。 析出的蛋白与载玻片有一定的结合力，可改善稳定性,一定程度上起了样品固定的作用 2.低温冷冻等方法处理蛋白样品，促使其有足够的硬度 3.其他AFM改进：轻敲模式、液相AFM扫描等方法 万事具备，只欠针尖！ AFM在生物大分子样品成像分析中的应用： 最早是观测生物膜蛋白的结构 成功观察了肌动蛋白、血纤维蛋白原、免疫球蛋白等游离蛋白质分子 和核酸 分子或原子进行加工: 搬移原子, 切割染色体, 细胞膜打孔等 AFM分辨率高、样品制备要求低、适用范围广 虽然最终还没能做出比较有效的实验结果，有机会希望可以继续这一工作，这一思路至少可以作为一个有益的尝试吧 最后感谢岑剡老师的关于这一设想的启发和慷慨提供的血红蛋白样品！ *