第八章_免疫标记技术.pptVIP

* * 操作过程 1. 用100ul 70%酒精孵育PVDF孔板，室温下孵育10分钟。 2. 倒去酒精，用100ul PBS洗涤3次。 3. 将100ul捕获抗体加入10ml PBS中，混合， 每孔加100ul， 盖上板盖，4℃过夜。 4.倒去液体，100ul PBS洗涤一次。 5.每孔加入100ul 2%脱脂乳PBS（见试剂准备），盖上板盖，室温下孵育2小时。 6.在水槽边和吸水纸上轻打，倒去液体。 7.用100ul PBS洗涤一次。 8.每孔加入100ul细胞悬浮液（含适当量的细胞和相应浓度的刺激剂）。细胞可预先在体外接受刺激（间接Eli-spot）。盖上标准的96孔板塑料板盖，37℃ CO2孵育箱中孵育一定的时间（15-20小时）。这期间不要晃动或移动孔板。 9.在水槽边和吸水纸上轻打，倒去液体。 10.每孔加100ul洗涤缓冲液，4℃孵育10分钟。 * 11.用100ul洗涤缓冲液洗孔3次 12.于10ml PBS-1%BSA中稀释100ul检测抗体，此为一板的量。每孔加100ul此液体，盖上板盖，37℃下孵育1小时30分。 13.倒去液体，用100ul洗涤缓冲液洗3次。 14.每板以10ml PBS-1%BSA稀释10ul的亲和素碱性磷酸酶。每孔加入100ul此液体，盖上板盖，37℃孵育1小时。 15.倒去液体，用100ul洗涤缓冲液洗3次。在吸水纸上拍打，吸干残留