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第四章 基因工程的受体系统;一、E.coli受体系统;1、E.coli受体系统的特点 ;;2、E.coli受体系统的优点 ;基因型：endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+)。 特点：具有四环素抗性和萘啶酮酸抗性。recA1和 endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。 用途：分子克隆和质粒提取。;基因型：F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])。 特点：该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。 用途：蛋白质表达。;基因型：F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cmR)。 特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。 用途：蛋白质表达;基因型：F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-, λ– 特点：一种常用于质粒克隆的菌株。 其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。 用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。 ;基因型：endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ(lac-proAB) e14- [F‘ traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。 特点：部分抗性缺陷，适合重复基因表达, 可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。 用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。 ;基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)， φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74， recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG 用途：高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。;第三节 基因工程的受体系统;二、枯草杆菌受体系统 ;1、枯草杆菌（Bacillus subtilis）受体系统特点 ①??最大优点：外分泌 ②??高水平表达，基因产物不发生沉淀  ③??纯化基因产物相对简单 ④??基因产物污染少 ⑤??基因产物不易被水解 ⑥??安全 ⑦??遗传背景仅次于E.coli2、缺点：  ①??转化效率相对较低  ② 表达水平较低 ;1.乳酸杆菌受体系统的独特优势: 乳酸杆菌是食品级微生物 乳酸杆菌本身分泌蛋白较少,Usp45是迄今已知乳酸杆菌分泌的唯一可检测蛋白,减少了载体微生物的自身蛋白对外源分泌蛋白的干扰 乳酸杆菌不产生任何细胞外蛋白酶,不会引起分泌蛋白发生细胞外的降解。;2.乳酸杆菌作为疫苗载体的优越性： 在呼吸系统、消化系统、泌尿系统定植, 对维持微生态平衡很重要。 在发酵食物中应用了几个世纪, 被认为是安全的有益微生物。 免疫方便、便宜、安全, 不需要注射 无免疫原性;四、酵母菌受体系统;安全性更大 遗传信息和生理状况更适合于真核基因表达 基因产物外分泌 遗传背景较清楚 具基因表达后加工机制;2.常用酵母菌受体系统;酿酒酵母;2.甲醇酵母受体系统的优点： 含特有的AOX（醇氧化酶基因）启动子，用甲醇可以严格地调控表达。 有完备的发酵方法, 可以高密度连续培养，其转化子能够非常稳定地表达外源蛋白质，蛋白产量高。 适应能力强，易于操作，可以在廉价的非选择性培养基中生长。 基因表达产物既可在胞内，又可被分泌到胞外，分泌的异源蛋白质占所有被分泌蛋白的30%以上，利于工业规模的生产。 能对要表达的多肤和蛋白质进行翻译后加工处理。;3.巴氏毕赤酵母的优点： 对外源蛋白的糖基化等更接近于哺乳动物细胞 表达蛋白水平高出酿酒酵母10-100倍。;1.动物受体系统优点： 表达外源基因具有后加工系统，基因产物具动物活性2.动物受体系