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实验三原代兔肾细胞培养
* * 一.原代兔肾细胞培养(二) --观察细胞 1.结果观察 ①有无污染 常见污染病原体:细菌,支原体,真菌 常见污染原因: 取材 环境 操作 ②是否形成单层 ③细胞形态 ※如果有杂质看不清细胞，先换维持液（上次课配制的）后观察。 2.换维持液: 上次课培养的原代兔肾细胞，吸出原生长液， 加入0.9毫升维持液（培养皿,如果是培养瓶 液体量增加）。 3.接种病毒 选其中一孔接入腺病毒0.1毫升，标记培养。 设对照。 （吸附30-1小时，PFU,接触病毒器件处理） 和接种病毒 二.传代细胞培养法 1.镜下观察传代细胞（Hela cell—1瓶/小组) 2.传代细胞（无菌操作，用煤气灯) ①取出原培养液（倒掉），加入细胞消化液5ml（0.25%胰蛋白酶加等量0.02% EDTA—)(已备）。 ②室温消化5分钟，细胞呈毛玻璃状。 ③去除消化液（倒掉)，加入生长液(生长液中的部分液体），反复吹打（用毛细管）。 注：生长液在桌面另一无细胞培养瓶内。 ④加入剩余生长液，混合，分装入两个培养瓶。 ⑤标记，37℃，静止培养。 * * *
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