预处理与固液分离.ppt

二、物理法 （一）干燥法 空气干燥、真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥 （二）冻融法（freezing and thawing） （三）渗透压冲击法（osmotic shock） 先把细胞放在高渗溶液中，细胞发生收缩，然后将介质快速稀释或将细胞转入水或缓冲液中，细胞快速膨胀，使产物释放至溶液中 三、化学法（Chemical treatment） （一）、加入化学试剂 1、用碱处理 2、用脂溶性有机溶剂 3、表面活性剂 （二）酶解法（Enzymatic lysis） （三）制成丙酮粉 四、选择破碎方法的依据 （一）、规模及成本 工业规模：高压匀浆和珠磨 （二）、目的物的稳定性 （三）、破碎效果和产物释放率 第三节 液-固分离 （一）过滤方式 1、常规过滤 2、错流过滤 一、过滤 错流过滤 （二）、过滤设备 1、板框过滤机 2、真空鼓式过滤机 （三）过滤介质和助滤剂 1、过滤介质：滤布或膜 2、助滤剂：要求为惰性物质、无毒、有一定细度及硬度，成本低廉。 常用有：硅藻土、纸浆、石棉、纤维素等 二、离心分离 1、过滤式离心机 2、沉降式离心机 3、管式离心机 三、影响液-固分离的因素 （一）、悬浮物种类 （二）、悬浮液黏度 （三）、其他因素 第三章内容小结 第 三 章 预 处 理 与 固 液 分 离 1.生物材料的预处理 2.细胞破碎 3.固液分离 1.了解预处理的目的 2.掌握去除杂蛋白和金属离子的方法和原理 1.掌握常用细胞破碎的方法 2.掌握各种方法的优缺点和适用范围 3.掌握高压匀浆法、高速珠磨法、超声波法、酶法破壁等概念 1.了解固液分离的方法 2.了解固液分离常用设备 复习思考题 ?去除发酵液中杂蛋白有哪几种方法？ 去除发酵液中钙、镁、铁离子的方法有哪些？ 影响絮凝效果的主要因素有哪些？ 细胞破碎有哪些方法？各有什么特点？ 超声波破碎细胞的原理？ 术语：凝聚作用，絮凝作用，错流过滤，渗透压冲击法 * * 左图为实验室用的组织捣碎匀浆机 右图为高压匀浆机 * 预处理 第三章 预处理 第三章 第一节 第二节 第三节 预处理 第三章 第一节 第二节 第三节 预处理 第三章 第一节 第二节 第三节 第三章 预处理和固液分离 何书英 中国药科大学生命科学与技术学院 2017.9 主讲教师： 第一节 生物材料的预处理 第二节 细胞破碎 第三节 液—固分离 本章内容 本章要求 1、了解生物材料预处理的目的，掌握去除杂蛋白和金属离子的方法和原理 2、掌握常用细胞破碎的方法，各种方法的优缺点和适用范围 3、了解液固分离的方法和设备 第一节 生物材料的预处理 为什么要预处理？ 生物材料的特点： 1、含量低 如胰岛素在胰脏中的含量为0.02%，胆汁中胆红素含量为0.05~0.08% 2、杂质多 3、易变性失活 预处理的目的在于去除杂质和改变滤液性质，以利于提取和精制的后续各工艺顺利进行 一、选择预处理方法的依据 1、生物活性物质来源、存在状态: “胞内” 、“胞外”、前体 2、后续工艺要求 3、稳定性 可被材料中酶、微生物破坏，还可能受酸、碱、盐、重金属离子、机械搅拌、温度、甚至空气和光线作用改变活性。 二、动物材料的预处理 绞肉机绞 匀浆和组织捣碎 三、细胞培养液的预处理 （一）、杂蛋白质的去除 1、加入凝聚剂 2、加入絮凝剂 3、吸附 4、等电点沉淀 5、加各种沉淀剂沉淀 6、变性沉淀 1、凝聚(coagulation) 凝聚作用是指在某些电解质作用下，使胶体粒子的扩散双电层的排斥电位降低，破坏了胶体系统的分散状态，而使胶体粒子聚集的过程。 凝聚的原理 在发酵液中加入具有相反电性的电解质： ①、中和胶粒电性，降低双电层排斥力。 ②、离子的水化作用，破坏胶粒的水化层。 影响凝聚作用的主要因素有无机盐的种类、化合价以及无机盐的用量等。 阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力的次序为： Al3+Fe3+H+Ca2+Mg2+K+Na+Li+ 常用的凝聚剂有：Al2(SO4)3·18H2O、AlCl3·6H2O、FeCl3、ZnSO4、MgCO3等。 2、絮凝 (flocculation) 絮凝剂是天然的或人工合成的有机高分子化合物，如壳聚糖、海藻酸钠、明胶及酰胺类衍生物、聚苯乙烯类衍生物和聚丙烯酸类等。 絮凝剂具有长链线状的结构，易溶于水，其分子量可高达数万至一千万以上，在长的链上含有相当多的活性功能团。 影响絮凝效果的因素主要有： （1）絮凝剂的分子量： （2）絮凝剂的用量： （3