植物基因工程及应用PPT.ppt

欢迎同学们听课！ 第四节 转基因的安全性 一、选择性标记的安全性　　基因工程引发的第一个安全性问题是：植物克隆载体中的标记基因是否有害？大部分植物载体含有kan抗性基因，以便筛选转基因植株。kan抗性基因，又称为nptII，来自于细菌编码新霉素转移酶II，对NPT II主要有两方面的担忧：　　1） 食品中的kan抗性基因是否能传给人体肠道中的细菌，产生对抗生素的抗性。　　2） kan抗性基因能否传给环境中的其他生物，导致生态系统的破坏。　　转基因食品通过人体的消化道与肠道中的细菌接触之前kan抗性基因已经被破坏，即使少部分未被破坏， 转化到细菌的机会也非常少。然而危险因素并不等于0。同样，实验证明，生长中的工程植株对环境的影响是可以忽略的，因为kan抗性基因在自然中早已存在，工程植株的存在只是增加了其浓度，将来的危害性不可预测。　　对kan抗性基因和其他标记基因的担忧促使生物技术学者探索培育无选择标记的转基因方法，或者能通过某种方法去除标记基因。其中一个策略利用噬菌体P1，含有Cre基因，它识别一个34kb的跨越序列，并可以将中间序列切除。利用这一系统，必须使用两个克隆载体进行转化，其中一个含有目的基因及选择标记基因，选择标记基因两端被Cre靶序列包围； 另一个载体含有Cre基因，转化完成后，Cre基因的表达可以将kan抗性基因从植物中切除。 那么，Cre基因本身是否会造成危害？转化中使用的两个载体同时整合到同一染色体上的几率较小，由于有性生殖过程中的随机分离，T1代有部分植株只含有一个整合片段，而不含有另一个，因此就可以获得不含选择标记基因和Cre基因，而只含目的基因的植株。 利用Cre系统去除标记基因 二、环境危害的可能性　　另一个担忧是：工程植株的新基因组可能以某种方式影响环境。如抗病毒基因工程经常使用外壳蛋白基因，当这样的植株受到另外一种病毒侵染时，可能产生一种新的杂交病毒，含有植物所合成的蛋白质外壳和侵染病毒的基因组。这种杂交的病毒可能具有意想不到的危害性，例如，新的蛋白质外壳可能扩大其侵染范围，原先有抗性的植物也可能受到侵染。　　在允许转基因植物释放之前，应该开展适当的试验，来预测工程植株对环境的可能的影响。不同的国家都有转基因植物田间释放的法规，在欧洲和北美洲大部分国家法规是比较严格的，潜在的危害可以降低至最小的限度。从长远来看，基因工程必须能保证产品向环境中的释放是安全的，产品的消费也是安全的。危险性评估工程与基因工程本身是同样重要的。 The End 4??聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示，多聚半乳糖醛酸酶的表达量明显降低。 转基因果实虽然也在逐渐的成熟，但可以存放很长的时间。这意味着反义RNA虽然不能完全将多聚半乳糖醛酸酶基因失活，但可以有效的降低基因的表达量，延缓成熟过程。 转基因番茄PG酶活性的变化 三. 病毒介导的遗传转化 　　植物病毒广泛存在，而且不受单子叶或双子叶的限制。因此病毒作为植物基因工程的载体日益受到人们的重视。在已知300种特征清楚的植物病毒中，单链RNA病毒约占91%，双链DNA病毒、单链DNA病毒各占3%。RNA不适合于作为克隆载体，因为RNA的操作非常困难。在植物上已知有两种DNA病毒，花椰菜花叶病毒（Cauliflower mosaic virus, CaMV）和双联体病毒（geminivirus），但都不是基因克隆的理想载体。 花椰菜花叶病毒载体已用来克隆了一个基因进入芜箐甘蓝，有两个因素限制了其应用：　　1） 花椰菜花叶病毒基因组的大小，即使是切除了非必须序列，花椰菜花叶病毒载体的承载插入片段的能力还是有限的，只能插入很小的片段。　　2） 花椰菜花叶病毒的寄主范围非常窄，主要是芸苔属植物如芜菁、甘蓝和花椰菜等。　　这类病毒比较有潜力侵染重要的作物，如玉米和小麦，然而在侵染过程中，这类病毒重新排列并删除部分序列，搅乱插入的DNA序列。这种病毒可引起破坏性的侵染，需要严格的防护，防止载体从寄主中逃逸侵染自然中的植物。所以花椰菜花叶病毒作为克隆载体还需要进一步的改造。 四. 基因枪转化法 　　农杆菌侵染双子叶植物获得转基因植株是非常成功的，自然界中的农杆菌只侵染双子叶植物，对单子叶植物不敏感。虽然通过添加乙酰丁香酮类物质可使农杆菌侵染单子叶植物，但单子叶植物的再生比较困难，因而农杆菌转化单子叶植物仍然是比较困难的。1984年，科学家发现，超螺旋结构的细菌质粒，虽然不能在植物细胞中复制，但可以重组整合到植物染色体内。受这一现象的启发产生基因直接转移技术。重组机制并不清楚。因为细菌质粒与植物DNA之间没有同源性。事实上整合是随机的发生在植物染色体的任何位点。 植物基因直接转移的原理 基因枪（particle gun）又称微弹轰击法（microprojectile