生物显微镜技术2-其他常用制片方法和特殊染色方法PPT.ppt

四、磨片法 骨，牙齿等组织，不经脱钙和切片，直接在磨石上用手工磨成大约50微米左右的薄片，然后再进行染色封固在载玻片上的标本。 1、取材和磨片 2、磨片脱脂和脱水 3、封固 4、染色：骨磨片可以经染色后再封固，这样结构可以清晰地显出。染色方法很多，如镀银、酸性品红、茜素红、大丽紫和结晶紫等。如用大丽紫染色后，骨小管呈蓝紫色 五、整体封藏法 一种是将胚胎或小动物经前期固定后整体封藏于盛满固定剂的透明容器中。 另一种是将发育至某一阶段的鸡胚整体取出，经固定、染色、脱水、透明后封固于载玻片上的标本。 六、铺片 将需要观察的薄片组织用手工的方法直接铺于载玻片上，然后经过固定、染色等程序制成的标本。例如蛙的肠系膜铺片，大白鼠的皮下组织铺片等。 第二节 特殊染色技术 特殊染色法是为了达到某些特殊的要求，或是为了观察特殊的组织结构，例如：观察间质的结构变化，需要作胶原纤维染色，弹力纤维染色或网状纤维染色。又如，要观察组织内某些物质的状况，例如糖，脂肪和粘液、纤维素等时，均需特殊显示的染色方法。 特殊染色的方法繁多，显示不同的物质需要不同的方法，显示相同的物质也有不同的方法。 随着科学的发展，目前在生物制片中，所应用的染色剂种类越来越多。 一、结缔组织染色法 结缔组织的组成 光学技术切片的结缔组织染色是指胶原纤维，弹力纤维和网状纤维染色，而通常所说的结缔组织染色多指胶原纤维染色。 ?（一）胶原纤维染色法 1、Ven Gioeson氏苦味酸复红法（1889） 此法是用来区分胶原纤维和肌纤维的经典染色方法，习惯称之为V－G染色法。 染液是苦味酸和酸性复红的混合液 操作方法：切片脱蜡常规至水，蒸馏水洗；Weigent氏铁苏木素液染核；水洗（用自来水充分冲洗）；1％酸盐酸酒精分化；流水冲洗；Ven Gieson氏苦味酸复红染色 1—5分钟；滤纸稍印干或用 95％酒精迅速脱色与脱水；无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封盖。 结果：胶原纤维红色，肌纤维黄色，核褐色。 2.Masson三色染色法 Masson三色染色法是由Mallory氏苯胺蓝菊黄G发展改良而来，但对于固定液有一定的选择性，虽然任何固定液固定后的组织可进行染色，但最好是用Zenker氏固定液或Bouin氏固定液固定组织。福尔马林固定的标本切片在染色前以3%升汞作第二次固定一小时以上，则可增强着色效果。 操作方法：略 结果：胶原纤维绿色（或蓝色），肌肉、纤维素红色，红细胞橘黄色，核蓝黑色。 （二）网状纤维染色法： 网状纤维染色，人医常作用于某些肿瘤的鉴别诊断，如癌与肉瘤的鉴别。还可作为恶性肿瘤的发生以及预后的观察。 网状纤维的染色方法很多，但都是嗜银浸染法，虽然各法操作步骤及染液的配制有所不同，其基本原理还是相同的。由于组织内的蛋白质与银化合物的结合，再经过还原而成为金属银，沉积于组织内及其表面，因此得以着色。 操作方法：（Gomri氏染色法） 结果：网状纤维黑色，胶原纤维黄色—桔黄色，细胞核呈灰黑色。 （三）弹力纤维染色法 弹力纤维较细，直径0.2-1微米，且坚固，弹性大，容易伸展，纤维分枝连接成网，没有原纤维，量少时不易与胶原纤维区分，量多时才可识别。HE染色与胶原纤维着色相似，若用弹力纤维染色法，则可分辨的很清楚。例如，观察血管弹力层的异常。 弹力纤维具强嗜酸性，用升汞，酒精固定染色较佳，适于福尔马林固定。 1.??Weigert氏弹力纤维染色法： 试剂配制： 盐基性复红（碱性品红）? ?? ?? ??1g 间苯二酚（雷锁辛）? ?? ?? ?? ?? ???4-5g 蒸馏水? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ? 200ml 29%三氯化铁水溶液? ?? ?? ?? ?? ?? 25ml  95%酒精? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ? 200ml? ? 浓盐酸? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ? 4ml 结果：弹力纤维呈暗蓝色，细胞核呈蓝色，胶原纤维呈红色，肌纤维呈黄色。 2. Verhoeff氏弹力纤维染色法： 试剂配制：将1克苏木素加热溶于20ml的无水酒精，冷却后，加1%三氯化铁水溶液8ml搅拌；再加入 8ml的Lugoi碘液（碘1克，碘化钾2克，蒸馏水100ml）搅拌混合而成。染液仅可存放2-3周。 结果：弹力纤维蓝黑色，其它组织视复染而定。 注意事项：这种染色法染液配制简单，但对微细弹力纤维不如Weigert氏效果好。 二、?肌肉组织染色法 Mallory氏磷钨酸苏木素染法(简称P、T、A) 试剂成分 Mallory氏磷钨酸苏木素 磷钨酸