太平洋磷虾蛋白酶生物化学组织化学研究.pdf

皇曼整登查兰篓兰堡!i圭量些堡兰一—— 太平洋磷蟀蛋秘鹣的生物化学和组织化学研究 摘 臻 磷虾，是磷虾科动物的通称，是～个甲壳类大家族，分布广泛予北太平 洋。它淡浮辩继耱为食谤，蕴子食稔键豁窃缴黔段。磷磐禳赫鸯溶，这与舔 体内存在高效的酶系统有密切的关系。该系统能够降解各种蛋白质、多糖， 并且降解迅速。 极磷虾体内具祷非常高效的消化系统，这是一个由多种酶和抑制因予相结合 戆复合酶系统。当磷虾死后，撵铡露予失去律惩，消槎：酶迅速将磷虾魏蛋囊 艨、多糖等降解。这种离效麓避自酶活性引起了人们的极大兴趣，现在已经 对其中的部分辫白酶分别进行了纯化和性质研究工作。例如，研究发现，与 脊雅动耪躬获蟹窦酶裰浣，磷好酶露纾维蛋彝彝貉蚕潦翡降撩蕤力燹强；已 经确定了一种磷虾外切酶的序刿，并且已在实验室合成成功。已从南极磷虾 箍取了8种蛋白酶：三释丝氯黢类胰骚自酶，一种墼氨酸类胰凝莪薅自酶， 以及霹释羧默瓣A，嚣转羧黢藤B。磷好酶终为一耱菠效豁复合酶，嚣藏已 被医用，例如对慢性溃疡的清剁，清除牙斑等。 的研究。我们观察到，太平洋辚虾死聪同样发生迅速国溶现象，因此推测在 其体内可能也存在一个高效的酶系统，而该系统在磷虾死后，抑制因子失去 俸鬟，歇蔼迅逮避将嚣螽覆、参禧等辩解。幽于海主进度稳捞，鱼群数量大 幅减少，作为照类饵料的磷虾数量大懈增加。目前磷虾的应用主要限于饵料 靛工，霞此研究其诲内黪蛋自酶，提高磷虾深船工的辩糯僵有重要静意义。 在本文中，进行-f”F歹g工{擘：对太平洋磷好蛋自辩狂酶艇襁关生纯牲袋 进行探讨：采鹪不同方法对其炎胰蛋臼酶进行提纯，并探讨了相关的生化往 舂’}洋磷lF装鑫戆豹生物化学秘蜒援纯擘垂)f究 质；蹙艏，确定了太平洋磷虾豹消化系统结构组或及爽胰鬣臼酶定位情况。 用O．05mol／L Tris。HCt(pH7。O)或蒸镶零砖太平洋磷烀进行粳捷，发瑗蒸 馏水糇提酶液巾的蛋爨翡活力蒋遮魄Iris—HC!躬蒲，且稳定挫好。凝酶其有 摄强静涩瘦稳定往。趁长辩蠲(30d)常溢20C傈毒下，酶灌损失小予15％： 对獠酶液进行热潦处瓒(15rain)，激浚范酗从蹩瀑歪100C，续暴发瑷，鞭懿 蛋白酶褥魅减多辐度小，其蛋白酶魄滔力逐濒提商。这点对于我们今后大规 模裁糖酶摄敬王终蠢j≥霉大静慧义，魄裁楚浚，我们可以道过篱鼙的热激方 式．去簿丈部分杂蘩国，觚而获褥耱酶。 通过0％一50％的硫酸铵沉淀比较发现，采用35％浓度的硫酸铵沉淀时(采 6．8磷酸楚缓冲滚滚辫沉淀)，沉淀中酶滔力损失疑少。 用pH 糕薅静适磨p}{(20C)较广。农pH 8一10 5．0时，鼗酶有高酶滋力。在pH 氇有较高酶活力，攥、蒺l在爨酶巾不筏露酸往蛋自酶存在，两基有多种碱镌蚤 囱酶存在。 采嘲DEAE Fast Sepharose Flow离予柱、Sephacryt$200凝胶过滤柱层析、 p-aminobenzamidine亲秘层援麟鸡羚类糖蘩鑫装秘溪掇簿努毽方法，获得粪获 缀白酶。采麓12％豹努离黢，瓣不潜缝化方法获缮的样晶龟泳焉，撼黧分子 蓬大约狂35kDa。 大平洋磷虾类鹱蛋囱酶的簸适pH鹰聪个，势躞凳5,0秘7,0。最逑反应 潺度为29℃(pH5，O)。 ca2+对类获鬃囱錾死乎浚帮激滔效莱，嚣M92+其备一迤鹃激活作翔。鸡 辩类秸甏宣籁Benzamidine矮存瓣鬟的静箭作掰，PMSF翻TLCK蠢稚剃雅惩， 露TPCK没有撵铡效果，这说明分掰出豹蛋自酶属于丝氮酸类鬣自酶。 为锻究本乎潍磷好类藏蛋鑫黪豹采源，霹菸漆健系绞逐行了缀绞学及继 缀化学熬疆究工作。太警洋鳞蛘的瀵他系统主婪分为潴化蛰秘演纯腺鼹都分。 游芘謦又霹分为食道、露(贲门霄鞫巍fj胃)、中肠、搿肠。消化腺主簧是串 肠艨。鬟微观察，湃化鹜鲍缀织结翰与对蛏的爨本楣憩，部出蠹肉翳分为题 2 孛瓣海洋太学域士骚究生攀韭论文 层：粘膜层、