酶学与酶工程第五章酶分子修饰学生（PPT X页）.pptVIP

例如： 首先用盐酸胍使胰蛋白酶的原有空间构象被破坏，通过透析除去变性剂后，在不同的温度条件下，使酶重新构建新的空间构象。 结果表明：在20 ℃的条件下重新构建的胰蛋白酶与天然酶的稳定性基本相同，而在50 ℃的条件下重新构建的酶的稳定性比天然酶提高5倍。 一、工具酶 限制性内切酶 II型酶的识别序列通常为4-6bP，具有回文结构，大多数酶是错位切割双链DNA，产生5’或3’末端突出的粘性末端(sticky end)。 GAATTC DNA连接酶 DNA聚合酶 末端脱氧核苷酰转移酶 二、载体 外源DNA本身没有自主复制能力，导入宿主细胞后不能随宿主细胞的繁殖而复制，达不到使外源DNA片段扩增的目的。如果要将外源DNA导人宿主细胞进行扩增成表达，就需要外源DNA与某种能在宿主细胞中进行自主复制和表达的DNA重组，并由其携带进入宿主细胞。这种可以用来插人外源DNA片段构建重组DNA分子，并将外源DNA携带进人宿主细胞的DNA称为基因克隆载体，简称为载体(Vector)。 三、基因突变技术 根据其特点，可将基因突变分为两大类：位点特异性突变和随机突变。 位点特异性突变又可大体分为三种类型：一类是通过寡核苷酸介导的基因突变；第二类是盒式突变或片段取代突变；第三类是利用聚合酶链反应(PCR)，以双链DNA为模板进行的基因突变。 1．编码基因的专一性位点突变 专一性位点