大菱鲆神经肽Y基因克隆和其在工厂化养殖饥饿-投喂策略中.PDFVIP

大菱鲆神经肽Y基因克隆及其在 工厂化养殖饥饿-投喂策略中的 表达特征分析 1，2 2 1 3 1，2 韩 建 ，刘 滨 ，姜志强 ，穆小生 ，雷霁霖 (1. 大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室，辽宁大连 116023；2. 中国水产科学研究院黄海水产研究所，农业部 海洋渔业可持续发展重点实验室，青岛市海水鱼类种子工程与生物技术重点实验室，山东青岛266071 ；3. 中国科学院 动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室，北京 100101） [摘要] 本文通过逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR ）和末端快速扩增技术（RACE ）克隆了大菱鲆神经肽Y （NPY ）基因全长为729 bp 的互补脱氧核糖核酸（cDNA ）序列，其中5′非翻译区（5′-UTR ）为70 bp ，3′非翻译 区（3′-UTR ）为359 bp ，开放阅读框（ORF ）为300 bp 。ORF 编码含有99 个氨基酸的蛋白质多肽，N 端28 个氨 基酸为信号肽，信号肽后是由36 个氨基酸组成的NPY 成熟肽。针对大菱鲆NPY 蛋白质与其他物种的同源 性进行比较，结果显示大菱鲆NPY 与其他物种的同源性在53.9 %~98 % ，特别是与同属于鲆鲽鱼类的牙鲆 和美洲拟鲽的同源性高达97 %~98 % ，表现出很高的保守性。采用实时定量PCR 对大菱鲆NPY 基因的表 达特征进行分析，结果表明，大菱鲆NPY 基因在神经组织和外围组织中都有表达，其中在下丘脑中的表达 量最高。饥饿实验中，随着饥饿的进行，NPY 的表达量显著变化（P0.05 ），呈现先升高再降低，再显著升高 并维持一段高水平表达后，再次下降的趋势，饥饿后再投喂会使NPY 的表达量升高，并且饥饿时间越长，再 投喂后NPY 的表达水平越高，但是再投喂2 h 后表达量还会再次下降至相似的水平，这都预示着NPY 是一 种摄食刺激因子，并且是一种短期的调控机制。 [关键词] 大菱鲆；NPY ；饥饿；投喂；差异表达 [中图分类号] Q78 ；S965 [文献标识码] A [文章编号] 1009-1742（2014 ）09-0042-08 [3] 次在猪的脑部分离提取出来 ，之后相继在哺乳动 1 前言 [4 ，5] 物、鸟类、两栖动物和鱼中被鉴定检测出来 。 神经肽Y （NPY ）属于胰多肽家族，此家族还包 NPY 在心血管功能、生殖及应激和免疫反应中 [6~ 12] 括多肽YY （PYY ）、胰多肽（PP ）和多肽Y （PY ）等， 都发挥着生理效应 ，其最重要的作用是促进摄 NPY 与由G 蛋白偶联受体构成的Y 受体家族密切 食，这不仅在哺乳动物、鸟类和两栖动物中得到证 [1] [13~ 15] [16] 相关 。并且NPY 与生物体的生长发育以及生活行 明 ，在鱼类中同样得到了证明 ，由此可推断出 [2] 为有很大的关系 ，尤其是动物的摄食，是一种内源 NPY 能够反映各物种的摄食情况。 性的促进摄食的非常保守的神经递质。NPY 第一 起初，NPY 在硬骨鱼类中的功能仅是作为促垂 [收稿日期] 2014-06-30 [基金项目] 国家自然科学基金资助项目 ；山东省优秀中青年科学家奖励基金项目（BS201