第一章 基因工程概述PPT.ppt

5. 琼脂糖凝胶电泳 1960s发明了琼脂糖凝胶电泳，可将不同长度的DNA分离开。 6. DNA测序技术 1975年F. Sanger、A. Maxam和W. Gilbert发明了DNA快速测序技术。 1980年Nobel化学奖 2.4基因工程的诞生 1980年Nobel化学奖 1972年斯坦福大学的Paul Berg小组完成了首次体外重组实验： 2.4.1. Berg的开创性实验 将SV40的DNA片断与?噬菌体的DNA片断连接起来。 （用DNA末端转移酶，而非限制性内切酶） 2.4.2. Boyer-Cohen实验 1973年斯坦福大学的S. Cohen小组将含有卡那霉素抗性基因的大肠杆菌R6-5质粒与含有四环素抗性基因的另一种大肠杆菌质粒pSC101连接成重组质粒，具有双重抗药性。 后来又把非洲爪蟾核糖体基因片断同pSC101质粒重组，转化大肠杆菌，并在菌体内成功转录出相应的mRNA。这是第一次成功的基因克隆实验。 Boyer-Cohen实验 Stanley Cohen 1986 Nobel生理或医学奖 Herb Boyer 外源DNA在寄主细胞内可大量扩增，和高水平表达。 3.1跨物种性 3.2无性扩增 外源基因到另一种不同的生物细胞内进行繁殖。 3 基因工程的特征 4.2重组体的制备 4 基因工程的主要操作内容 4.1 目的基因的获取 从复杂的生物基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片断。 将目的基因的DNA片断插入到能自我复制并带有选择性标记（抗菌素抗性）的载体分子上。 将重组体（载体）转入适当的受体细胞中。 4.4.克隆鉴定 4.3.重组体的转化 挑选转化成功的细胞克隆（含有目的基因）。 4.5.目的基因表达 使导入寄主细胞的目的基因表达出我们所需要的基因产物。 制造带有抗生素抗性基因或有产生病毒能力的基因的新型微生物有可能在人类或其它生物体内传播。 5.1对环境的影响 5.2 新型病毒的出现 重新组合一种在自然见尚未发现的的生物性状有可能给现有的生态环境带来不良影响。 5.基因工程的安全隐患 将肿瘤病毒或其它动物病毒的DNA引入细菌有可能扩大癌症的发生范围。 5.4.人造生物扩散 新组成的重组DNA生物体的意外扩散可能会出现不同程度的潜在危险。 5.3癌症扩散 6.1. 公众的担忧 6重组DNA研究的安全准则 1973年美国的公众第一次公开表示担心应用重组DNA技术可能会培养出具有潜在危险性的新型微生物，从而给人类带来难以预料的后果。 1974年美国国立卫生研究院（NIH）考虑到重组DNA的潜在危险，提请Paul Berg博士组成一个重组DNA咨询委员会。 这个由11名分子生物学和重组DNA权威学者组成的委员会在同年7月发表公开信（science,158,303)，要求在没有弄清楚重组DNA所涉及的危险性范围和程度，以及在采取必要的防护措施之前，暂停两类试验（带抗生素抗性和肿瘤病毒及动物病毒）。 6.2. 专家的态度 6.3.制定安全规则 1976年6月23日，NIH正式公布了“重组DNA研究的安全准则”。 规定了安全防护（物理防护和生物防护）标准以及禁止若干类型的实验。 1979年、1981年、1989年NIH又做了多次修改，放宽了许多限制。 分4级：P1—P4级。 （1）实验室的物理安全 6.4. 基因工程的安全措施 一般装备良好的普通微生物实验室。 ① P1级实验室 ② P2 级实验室 在P1级实验室的基础上还装备有负压的安全操作柜。 基因本身也是一个产业 Rockfeller 大学将人肥胖基因出售0.2亿美元（1995年3月） Amgen公司将FKBP神经免疫因子配体转让达3.29亿美元（1997年） Millennium公司以4.65亿美元向Bayer公司转让225种基因的开发权（1998年9月） 一、基因工程的概念 1.基因工程的概念 基因工程也称为基因操作或DNA重组技术，是20世纪70年代以后兴起的一门新技术。 基因工程是指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其他载体分子，构成遗传物质的新组合，并使之掺入到原先没有这类分子的寄主细胞内，而能持续稳定地繁殖。 基因工程创造新生物，并给予新生物以特殊功能。 通过基因操作来定向改变或修饰生物体或人类自身,并具有明确目的的活动称为基因工程。 主要原理是应用人工方法把生物的遗传物质，通常是脱氧核糖核酸（DNA）分离出来，在体外进行切割、拼接和重组，然后将重组了的DNA导入某种安全无害宿主细胞或个体，从而改变它们的遗传特性，有时还使新的遗传信息在新的宿主细胞或个休中大量表达，以获得基因产物（