110基础生物化学实验@中科大实验一 蛋白质含量的测定PPT.pptVIP

实验一 蛋白质的定量测定? 实验目的：1.1掌握紫外法、Folin－酚试剂法（Lowry法）和考马斯亮蓝染色法（Bradford法）测定蛋白质含量的原理和方法1.2掌握分光光度计的原理和使用方法 蛋白质含量测定有许多种方法，如何选择合适的方法主要基于以下五点考虑： ①有多少样品可供分析; ②蛋白质样品浓度大约是多少; ③样品中含有哪些可能影响定量的化学物质；④所选方法是否简单、可靠。 2.2最常用的方法主要有 ①紫外法；②Folin－酚试剂法（Lowry法）；③考马斯亮蓝染色法（Bradford法）。 每种方法都有一定的灵敏度，被测样品中蛋白含量应控制在其灵敏度范围内。 测定绝对含量应用凯氏定氮法。 蛋白质在紫外光区（190nm-360nm）有两个强烈吸收峰：280nm和190nm。 280nm有吸收的电子所需能量较少，因为这些光子存在于芳香环的共轭双键中，色氨酸(Trp)、和酪氨酸(Tyr)有芳香环，可吸收280nm波长的光子，苯丙氨酸（Phe）、二硫键也有微弱吸收。蛋白质的吸收强度与上述几种氨基酸的含量有关，因此相同浓度的不同种类蛋白质，其280nm的吸收值差别很大(图1)。 一 紫外法 肽键在190nm有强吸收峰。 一般分光光度计在190nm的光强较弱，且O2在此波长有吸收，因此通常使用205nm或210nm波长，Trp, Phe, Ty