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16植物原生质体融合技术 体细胞杂交 （二）体细胞杂交的类型 根据融合时细胞的完整程度，原生质体融合可分为两大类： ·对称融合（asymmetric fusion）——即两个完整的细胞原生质体融合。·非对称融合（symmetric fusion）——利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再进行融合。 （三）植物体细胞杂交发展历程 1971年，Takebe离体烟草原生质体培养首次获得再生完整植株；1972年，Carlson首次获得第一个植物细胞杂种――粉蓝烟草和郎氏烟草的细胞杂种。 1974年，Kao采用聚乙二醇诱导融合法诱导植物细胞融合，建立了相应的融合技术；1978年，Melchers首次获得属间细胞杂种（番茄＋马铃薯 ) 1981年，Zimmerman发明了电融合仪，并首次提出了电融合概念； 电融合中的主要融合参数：包括交流电压、交变电场的振幅频率、交变电场的处理时间；直流高频电压、脉冲宽度、脉冲次数等。 融合技术要点： 融合液：CaCl2.2H2O 8~10mmolKH2PO4 0.7mmol甘露醇或山梨醇 0.5~1.0molpH 5.6诱导液：融合液＋PEG 20～45％ 影响原生质体融合的因素 首先，原生质体质量对细胞的融合起着至关重要的作用，高质量的原生质体是细胞融合