1血清免疫球蛋白IgG提取1PPT.pptVIP

* 盐析法纯化血清中IgG类抗体 实验目的 掌握盐析法提取血清免疫球蛋白IgG抗体的原理 熟悉血清IgG提取纯化操作过程和方法 二、实验原理 蛋白质在不同浓度的盐溶液中相对溶解度不同，它在一定浓度的中性盐溶液中易于沉淀，而其他蛋白质组分在此时不易沉淀，通过离心可将两者分离。 透析法脱盐: 透析是将含有小分子杂质的蛋白质溶液装在半透膜（玻璃纸、火绵纸等）制的透析袋里放在透析缓冲液中进行，可不断更换缓冲液，直至杂质被除去 四、操作步骤 室温静置30min, 4℃离心，4000rpm,10min 上清液（β球蛋白） 沉淀为γ球蛋白 紫外分光光度计测定蛋白含量 沉淀溶于1mL生理盐水 移入透析袋，充分透析， 沉淀溶于1mL生理盐水, 滴加饱和硫酸铵溶液0.5mL 弃去上清液（含清蛋白） 弃去上清液（α、β球蛋白） 沉淀溶于1mL生理盐水, 滴加饱和硫酸铵溶液0.5mL 室温静置30min, 4℃离心， 4000rpm,10min 1mL血清＋1mL生理盐水 滴加饱和硫酸铵溶液2mL 室温静置30min, 4℃离心， 4000rpm,10min 六、注意事项 盐的饱和度：影响盐析的重要因素，不同蛋白质的盐析 要求盐的饱和度不同 pH值：在等电点时，蛋白质溶解度最小越易沉淀析出。 蛋白质浓度：越大越易沉淀，使用盐的饱和度的极限愈低。过高也易引起其他杂蛋白共沉。 温度：一般可在室温下