2。2动物细胞工程PPT.ppt

第二节 动物细胞工程 单克隆抗体等 动物细胞培养 动物体细胞克隆 动物细胞融合 是其他动物细胞 工程技术的基础。 从机体取出相关组织细胞,分散成单个后在适宜的培养条件下让细胞生长和增殖 一、动物细胞培养的概念： 1、概念：动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖. 2、原理：细胞增殖 3.动物细胞培养的条件: 1）无菌无毒 的环境： 适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为36.5±0.5℃。 适宜的酸碱度：PH：7.2-7.4 液体合成培养基：（糖、氨基酸）、促生长因子、（水、无机盐、微量元素）等；通常还需加入血浆、血清等天然成分。 4）气体环境： 2）营养： 3）温度和pH： “95％空气+5％CO2”的混合气体培养箱。氧气是细胞代谢必须的； CO2维持培养液的PH。 对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。 动物细胞培养的过程： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 剪碎组织 分散成单个细胞 细胞悬液 10代细胞 50代细胞 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 发生癌变 无限传代 培 养 液 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 正常细胞 分化程度低，分裂旺盛 原代培养 定义：把第1代细胞的培养与传10代以内的细胞培养统称为原代培养。 定义：当原代培养的细胞生长停止，这时如果要使细胞继续生长，就要及时用胰蛋白酶等，使细胞从瓶壁上解离下来，然后加入新的培养液，将细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内，这个过程称传代培养 传代培养 ■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 强调二：接触抑制 细胞株：传代细胞一般能传到40-50代，遗传物质一般不会发生改变，叫细胞株。 细胞系、细胞株 细胞系：传代50代以后不能再传下去，部分细胞遗传物质发生了改变，能连续传代，获得不死性，叫细胞系。 问题3：为什么用胰蛋白酶处理？ 问题1：为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。 问题2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养。 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，胰 蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和 细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。 问题4：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？ 动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适宜PH为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜PH为2. 问题5：用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？ 控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。 问题6、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？ 问题7、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 问题8、动物细胞培养的原理： 细胞增殖。 获得细胞 细胞的全能性 细胞 植物体 培养结果 或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株等 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 培养基的营养成分的主要区别 液体培养基 固体培养基 培养基的物理性质 细胞增殖 主要原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 4、植物组织培养和动物细胞培养的比较 主要应用 1、定义：指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。 动物细胞融合 ◆细胞杂交：不同基因型的细胞之间的融合就是细胞杂交。 ◆杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞成为杂交细胞。 细胞融合是正常的生命活动 两个细胞正在融合 受精作用 2、诱导融合的因素 生物法：灭活的病毒诱导融合.(利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。 这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。) 化学法：聚乙二醇PEG诱导融合. 物理法：电刺激融合 3、动物细胞融合技术的应用 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。 思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 人们获得抗体的传统方法是? 将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体 这种方法的缺点是什么?