4 细胞工程在环境污染治理中的应用1PPT.pptVIP

动物细胞工程 动物细胞工程中技术最成熟、影响最大的是细胞融合。 动物细胞的培养要模拟体内生理环境进行离体培养。 细胞培养在无菌条件下进行，不出现细胞分化和形成组织 分为悬浮型细胞培养和贴附型细胞培养。 影响动物细胞体外培养的因素 动物细胞融合 病毒诱导融合，最有效的是副粘病毒。 化学诱导融合，聚乙二醇等。 电激诱导融合，操作简便、效率高、无残留毒性。 诱导细胞融合的病毒 PEG诱导细胞融合的可能机制 杂种细胞的筛选 Founded in 1895 Founded in 1895 第4讲 细胞工程在环境污染治理中的应用 1 细胞工程基础 细胞工程，是指以细胞为基本单位进行培养、增殖或按照人们的意愿改造细胞的某些生物学特性，从而创造新的生物和物种，以获得具有经济价值的生物产品的技术。 上游工程，包含细胞培养、细胞遗传操作和细胞保藏。 下游工程，将已转化的细胞应用到生产实践中去，以生产生物产品的过程。 目前细胞工程所涉及的主要技术有：动植物组织和细胞的培养技术、细胞融合技术、细胞器移植和细胞重组技术、体外授精技术、染色体工程技术、DNA重组技术和基因转移技术等。 细胞工程与基因工程的关系 细胞工程的主要技术及其应用 细胞的大小及分类 细胞是细胞工程操作的主要对象。 细胞是一切生物最基本的结构单位和功能单位。 一个细胞体积的最小极限直径是100nm，支原体是目前发现的最小最简单的细胞。 细胞直径的上限可达数百微米，卵细胞不受此限。 各类细胞直径的比较 原核细胞和真核细胞的主要区别 细胞周期 无丝分裂：最简单的分裂方式，以横裂或纵裂的方式，一个细胞变为两个细胞。 有丝分裂：细胞分裂的主要方式，染色体复制后平均分配到两个子细胞中，包括间期、前期、中期、后期和末期五个阶段；一个间期细胞经过有丝分裂变成两个子细胞。 减数分裂：发生在有性生殖细胞中的一种特殊形式的有丝分裂，细胞核和细胞质连续分裂两次，染色体仅复制一次，子细胞染色体数目是原来母细胞的一半。 微生物细胞工程 应用微生物进行细胞水平的研究和生产，包括各种微生物细胞的培养、遗传性状的改造、微生物细胞的直接利用或获得细胞代谢产物等。 微生物的培养：包括不同微生物的营养要求以及各种微生物的培养方法——发酵工程。 遗传性状的改造：原生质体融合、物理或化学诱变、DNA重组等方式改变微生物的遗传性状，获得高产菌株。 微生物细胞的应用：应用微生物细胞本身如生产单细胞蛋白，或利用微生物细胞进行有用产物的生产。 微生物原生质体融合技术 能够在不具有接合作用的菌株之间，或对感受态尚不了解的菌株，除去细胞壁后，原生质体之间可以比较容易的进行细胞质融合，进而核融合。 对于链霉菌、酵母菌、丝状真菌等，载体转化较为困难，消除细胞壁的原生质体是其应用重组DNA技术的关键环节。 微生物原生质体融合 原生质体及其制备 除去细胞壁，制备原生质体； 维持适当的渗透压保持原生质体的稳定性； 将原生质体置于高渗再生固体培养基后，再生细胞壁。 渗透压对原生质体的影响 不同微生物细胞的脱壁方法 融合重组 将两亲株的原生质体混合在一起，促进融合，再把融合液涂布在平板上再生，检出重组子。 原生质体再生成细胞 用高渗稳定剂进行稀释，涂布于再生培养基平板上再生，菌落数为原生质体和非原生质化细胞的总合； 用水稀释，使原生质体破裂失活，然后涂布于再生培养基平板上再生，菌落数为非原生质化的细胞数。 融合重组的测定 采用染色体标记的遗传重组体检测，重组子应具有两亲株的双重营养缺陷型或者双重抗药性； 直接法：将融合液涂布于不补充两亲株生长所需营养物或补充两种药物的再生培养基平板上，直接筛选出原养型或双重抗药性的重组子； 间接法：将融合液涂布于营养丰富的再生板上，使亲株和重组子都再生，然后用印影法复制到选择培养基上以检出重组子。 原核细胞的原生质体融合 革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌细胞壁的比较 革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌细胞壁成分的比较 革兰氏阳性菌的原生质体融合 培养细胞：对数生长中期。 收集细胞：离心收集，高渗培养。 细胞融合：酶解细胞壁，离心，高渗培养，聚乙二醇促进 原生质体融合，高渗稀释。 重组子筛选：选择培养基筛选，鉴定。 革兰氏阴性菌的原生质体融合 肽聚糖层较薄，但结构复杂，含脂质/蛋白质/多糖。 溶菌酶处理后仍含部分细胞壁，称为原生质球。 真核细胞的原生质体融合 真菌细胞壁较为复杂，由几丁质/葡聚糖等构成，可用消解酶、蜗牛酶、纤维素酶或几丁质酶等处理； 真菌一般为单倍体，融合后形成真正单倍重组体的融合子才能稳定传代，杂合双倍体不稳定； 融合过程包括细胞融合形成异核体，不同核融合形成二倍体，融合核交换和重组生成重组体。 植物细胞工程 以