6 植物细胞培养与次生产物生产4PPT.ppt

生产方式 生产周期 紫草宁含量 （％干重） 完整植株 2～3年 1～2 植物细胞培养 3周 14 来自于植物体和细胞培养的紫草宁含量比较 产品成分 用途 年销售额 （亿美元） 长春花碱 治疗白血病 18～20（美国） 阿吗灵 循环系统障碍药 5～25（全世界） 奎宁 治疗疟疾 5～10（美国） 致热素 杀虫剂 20（全世界） 毛地黄 心脏病药 20～55（美国） 植物次生代谢产品的市场潜能 植物细胞大规模培养的技术要求： 从工程的角度讲必须要进一步研究和开发适宜于植物细胞生长和生产的生物反应器，建立最佳的控制和调节系统； 从培养技术方面讲必须满足以下三个条件： 培养的细胞在遗传上应是稳定的，以得到产量恒定的产物； 细胞生长及生物合成的速度快，在较短的时间内能得到较高产量的终产物； 代谢产物要在细胞中积累而不被迅速分解，最好能将其释放到培养基中。 二.植物细胞规模化培养体系的建立 种子细胞选择 种子细胞增殖与放大培养 大规模培养体系建立 种子细胞选择 外植体选择 高产细胞选择 植物类型：植物细胞的遗传基础是天然产物生产的基本影响因素，不同植物产生的天然产物种类之所以不同，从根本上来说是因为它们具有不同的遗传基础。在确定生产某一种化合物以后，首先必须准确选择那些能够产生目的化合物的植物种类及其品种或单株。 组织器官：由于天然产物一般为次生代谢产物，而植物次生代谢产物的积累具有组织器官特异性，因此，在起始细胞培养时应尽量选择自然状态下产生天然产物的器官、组织为外植体。 在起始材料选择后，建立细胞系。由起始材料建立细胞系如果目的产物符合要求，即可进入下一环节的生产。 ? 部分代表性植物次生产物及其植物资源 工业用途 次生产物 植物资源 医药 可待因（植物碱） Papaver somniferm ? 薯蓣皂苷配基 Dioscorea deltoidea ? 奎宁 Cinchona ledgeriana ? 地高辛（异羟基洋地黄毒苷原） Digitalis lanata ? 莨菪胺 Datura strathus ? 长春花碱 Catharanthus roseus 农业化学 除虫菊酯 Chrysanthemum cinerariaefolium 食品，饮料 Thanmatin Thanumatococcus danielli 化妆品 茉莉油 Jasmimum spp. 有效成分分析 悬浮细胞系 单细胞克隆 种细胞增殖 在大多数情况下，来自起始材料的细胞系通常是一个异质细胞群体，细胞间在次生产物积累能力上有很大差异。 为了提高筛选效率，还可根据后续的培养条件适当增加选择压力，也可采用一些突变的方法进行高产突变细胞系筛选。 李志勇等（2002）直接利用起始培养细胞，挑选不同细胞团建立了10个大蒜细胞悬浮系，比较研究显示，不同悬浮细胞系间SOD合成能力具有显著差异，合成能力最高的细胞系可达10.81×106 UL-1，而最低只有2.37×106 UL-1。 梅兴国等（2001）通过在培养基中添加1.6 mML-1的L-Phe，筛选出了抗苯丙氨酸红豆杉细胞变异系，抗苯丙氨酸细胞系的紫杉醇含量高于原型细胞系的3～5倍 种子细胞增殖与放大培养 种子细胞的增殖与放大培养，是建立细胞规模化培养体系的中间环节。 目的之一是要获得大量的活跃生长的细胞群体，为细胞大批量生产准备基础材料。 种子细胞增殖初期一般采用液体振荡培养，也称摇瓶培养，其摇瓶体积一般从几百毫升到几升逐级放大。在此过程中，应不断检测细胞放大培养中因培养体积的增加所引起的细胞生长特性和目的产物含量的变化情况。 目的之二是为大体积反应器培养提供技术参数。 当细胞数量增加到一定数量后，应转移至体积较小的生物反应器培养，模拟大规模培养控制条件。 大规模培养体系的建立 植物细胞大规模培养，根据一个培养周期中是否添加培养基分为成批培养、连续培养和半连续培养方式等。 不同植物细胞生长和产物代谢存在较大差异，基本方式的选择应根据次生产物积累特点而定，通常还根据不同要求进行相应改进。 当细胞生长和产物合成需要不同培养基时，就需要采用两步法建立培养体系，先在细胞生长培养基中培养大批量细胞，当细胞生长至合成产物的阶段后，再将其转入到产物合成培养基中培养，在产物合成阶段又可采用连续培养方式以延长细胞生产时间。 成批培养（batch culture）：成批培养是指在一个培养体积中接种细胞和添加培养基后，中途不添加培养基也不更换培养基的方式。 它事实上就是一种放大的悬浮培养方式，其细胞生长动态与实验室摇瓶培养一致，成典型的“S”生长曲线。在一个培养周期中，当细胞生长进入缓慢生长达到静止期时，往往是细胞次生代谢产物积累的时期，此时应尽可能维持细胞活性，延长生产周期，以便获得较高