专题1《基因工程》复习PPT.ppt

专题1《基因工程》复习;基因工程;标记基因、目的基因、T-DNA、Ti-质粒、启动子、终止子、限制酶、DNA连接酶、逆转录酶、基因文库、基因组文库、 cDNA文库、PCR技术、热稳定DNA聚合酶、引物、转化、农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、显微注射技术、感受态细胞、DNA分子杂交技术、（基因）探针、杂交带、抗原-抗体杂交;复习的主要内容;三、基因操作的工具;1、限制酶??? ;▲“黏性末端”和“平末端”; 1. 要想获得某一个特定性状的基因(即”目的基因”)必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？;2、DNA连接酶??? ;;3、运载体??? ;质粒;（1）获取目的基因有什么方法？ （2）如何从基因文库中获取目的基因？ （3）简述利用PCR技术扩增目的基因的前提和过程。 （4）基因工程的核心是什么？ （5）一个基因表达载体包括哪些部分？分别有什么作用？ （6）简述目的基因与运载体结合的过程。 （7）基因工程常有的受体细胞有哪些？ （8）将目的基因导入植物细胞有哪些方法？采用最多的方法是什么？试简述该方法的操作过程。 （9）将目的基因导入大肠杆菌最常用的转化方法是什么？（10）简述目的基因的分子检测的步骤和方法。;四、基因工程的基本操作程序;;步骤一 获得目的基因;基因组文库的构建模式图;cDNA合成过程 ;利用PCR技术扩增目的基因;氢键断裂，形成单链DNA。;细胞内复制 .VS. PCR扩增;?;表达载体需由哪几部分组成;第三步：将目的基因导入受体细胞;将目的基因导入受体细胞（植物细胞）;将目的基因导入受体细胞（动物细胞）;将目的基因导入受体细胞（微生物细胞）;步骤四 目的基因的检测和鉴定;归纳: 基因工程的基本操作程序;1．已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点，如图中箭头所指。如果在该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现有多个上述线性DNA分子，若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是（ ） A．3 B．4 C．9 D．12;2．限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何？ A. BamHI和EcoRI；末端互补序列—AATT— B. BamHI和HindⅢ；末端互补序列—GATC— C. EcoRI和HindⅢ；末端互补序列—AATT— D. BamHI和BglII；末端互补序列—GATC—;3．已知某质粒上有2种限制性核酸内切酶的酶切位点，且两种酶的识别序列不同，如右图所示。若在多个该质粒中，加入限制酶Ⅰ、限制酶Ⅱ进行切割后，再加入DNA连接酶进行连接，结果得到的环状质粒中，碱基数目最少为 A．50 B．100 C．200 D．250;4．对符合设计要求的重组质粒进行酶切。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图中标示的酶切位点和所列的识别序列，采用（EcoRⅠ和PstⅠ）酶切，与采用（EcoRⅠ和SmaⅠ）酶切，分别能得到几种DNA片断（ ） A．1种 1种 B ． 1种 2种 C ． 2种 1种 D ． 2种 2种;5.根据基因工程中的操作步骤，回答以下问题： 目的基因能与运载体结合，说明 ，目的基因能在受体细胞中得到表达，说明 ，受体细胞具备的条件是 。如何检验质粒是否导入受体细胞？ 。如何检测目的基因是否得到表达？ 。;6.（12分）某质粒上有SalI、HindIII、BamHI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图9所示，请回答下列问题： ????（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sa1 I酶切，酶切产物用__________催化连接后，两个DNA片段的连接结果有_______________种。 ?? （2）在构建重组质粒时，应选用__________两种酶对__________进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。 ?? （3）为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入______________，理由是______________。 ??; ? （1）DNA连接酶?? （2）Sal I、Hind