免疫学技术(17,24)PPT
*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;Hubei University;Hubei University;Hubei University;Hubei University;Hubei University;Hubei University;Hubei University;Hubei University;Hubei University;Hubei University;Hubei University;Hubei University;Hubei University;Hubei University;Hubei University;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;思考题; 免疫细胞的检测
一、免疫细胞的分离与类型鉴定
;*;;*;(二)淋巴细胞亚群分离;*;*;*;举例1:E花环形成试验
原理:
人类T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞受体(CD2分
子),简称E受体。故T淋巴细胞体外能直接与绵羊
红细胞(SRBC)结合,形成E-花环
(如图所示);
举例2.磁性分离法
生物磁性分离技术是一项简便又迅速的、无需昂贵细胞分选设备的分离淋巴细胞的方法。这项技术利用高度特异的单克隆抗体和包含磁性材料的多聚体颗粒。
; 原理:磁珠上包被有抗细胞表面抗原(如 CD3、CD4、CD8、CD19等)的单克隆抗体,作为第一抗体。用抗免疫球蛋白的单抗(相应种系)或抗荧光染料作为第二抗体。有两种方法可选用这些磁珠来分离细胞。在直接法中磁珠上包被有针对特定细胞抗原的单克隆抗体,细胞与磁珠上的抗体结合(阳性选择细胞),施加磁场于试管使细胞固定。未固定的细胞(阴性选择细胞)即从管中去除。阳性细胞通过洗涤和从磁珠上解离而被回收。在间接法中,针对靶细胞抗原的单抗首先加入到细胞悬液中,与抗体孵育后,细胞洗涤,再与合适的包被抗IgG二抗的磁珠混合,结合到磁珠上的细胞(阳性选择)被磁场固定,非固定细胞(阴性选择)被除去,然后把阳性选择的细胞从磁珠上洗涤解离下来。
应用:
可用来分离大范围的表达相应抗原的细胞型别。;举例3、APAAP桥联酶标法测定T细胞亚群
原理:
T细胞是一类免疫系统中最重要的免疫细胞,根据其膜表面CD分子的不同,可将其分为CD3+CD4+CD8-T细胞和CD3+CD4-CD8+T细胞两类。
APAAP复合物是将小鼠抗碱性磷酸酶抗体结合成抗原-抗体复合物。
样本(外周血单个核细胞,PBMC)固定于载玻片上。利用抗人T细胞CD的McAb与T细胞反应,再用羊抗鼠IgG进行桥联,其中一个Fab段连接抗T细胞CD的McAb,另一个Fab段连接APAAP复合物中的抗碱性磷酸酶抗体,然后通过复合物中的碱性磷酸酶催化底物显色来判断CD分子的存在,从而确定T细胞的各亚群。; 应用:
本实验可用于T细胞的检测以判断机体的免疫功能状态,有助于疾病的诊断。例如,在艾滋病患者中,CD4/CD8比例下降。也可以帮助确定其他细胞表面标记分子,如MHC Ⅰ和MHC Ⅱ分子。
;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;举例:酶联免疫斑点试验(ELISPOT)
原理:
产生特异性抗体的单个B细胞或分泌特异细胞因子的单个T细胞可通过免疫斑点法来测定。测定抗体生成细胞,将淋巴细胞加入抗原的致敏板中,产生特异性即与抗体产生细胞邻近的抗原发生结合,利用偶联在抗免疫球蛋白上的酶和显色剂,结合抗体的斑点即可被检测。测定细胞因子产生细胞的板用抗细胞因子抗体包被,捕获细胞因子用酶标记的抗细胞因子不同表位的抗体来测定。
应用:
检测免疫细胞所分泌细胞因子和抗体水平,可反映抗体免疫的功能状态;*;*; 三、淋巴细胞功能测定的体内试验
正常机体对特定抗原产生细胞免疫应答后,再用相同抗原做皮肤试验,即出现以局部红肿为特征的迟发型超敏反应。细胞免疫低下者呈阴
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