基因工程课件4——实验3：聚合酶链式反应技术PPT.pptVIP

安徽大学生命科学学院 实验三 聚合酶链式反应技术 （PCR技术） 实验目的与要求 掌握PCR反应原理 学习引物序列的设计 学习PCR反应体系的设计 学习PCR反应程序参数的设计 学习通过聚合酶链式反应(PCR)在体外大量扩增位于两段已知序列间的DNA区段。 Contents 一、实验原理 二、实验材料 三、实验步骤 四、预期结果 五、注意事项 一、实验原理 1、聚合酶链式反应技术简介 2、基本原理及特点 3、一个典型PCR的反应体系及程序参数介绍 4、DNA聚合酶 5、寡核苷酸引物的设计 1、聚合酶链式反应技术简介 多聚酶链式反应(polymerase chain reaction)简称PCR技术，是1983年，美国科学家K. B. Mullis发明的一种体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法。 PCR技术已迅速渗透到分子生物学的各个领域，引起了生物技术发展的一次革命，目前它在分子克隆， 目的基因检测，遗传病的基因诊断，法医学，考古学等方面得到了广泛的应用。 PCR反应循环示意图 5’ 3’ 3’ 5’ 94℃ 高温变性 双链DNA分离出2条单链DNA分子 53℃ 低温退火 5’ 3’ 3’ 5’ 一对特异性引物分别结合到两条单链模板DNA上。 上游引物 下游引物 72℃ 适温延伸 5’ 3’ 3’ 5’ 在DNA聚合酶的作用下，dNTPs从引物3’端开始参