外源性纤维素对草鱼生长性能及肠道菌群的影响.docx

外源性纤维素酶对草鱼生长性能及肠道菌群的影响原文来源：Zhou Y, Yuan X, Liang X F, et al. Enhancement of growth and intestinal flora in grass carp: The effect of exogenous cellulase[J]. Aquaculture, 2013, 416: 1-7.摘要：植物蛋白已经被确定为在水产养殖上具有最大潜力的能够替代鱼粉的食物蛋白来源。然而，植物成分里含有大量的纤维素，鱼类利用糖类物质的能力有限。纤维素作为一种糖类物质不能很好地被鱼类利用。我们这个实验用浮萍饲养草鱼来研究外源性纤维素对草鱼生长的影响。2个月的饲养试验显示：纤维素能促进草鱼的生长。另外，纤维素还能增强草鱼各种消化酶活性，例如纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶，但是脂肪酶活性没有增加。同时，PCR-DGGE分析表明：饲喂纤维素的鱼肠道菌群的种类和密度都有变化，实验组和对照组样品的DGGE条带通过聚类分析表现出很小的相似性，有些条带是对照组特有的而有些条带只有实验组才有。16SrRNA测序表明变形菌门和厚壁菌门是两个优势菌群，而确定的有助于消化的细菌包括杆菌和鞘氨醇单胞菌。之前的研究和本实验建议:内源性的消化酶并不足以消化吸收纤维素，所以纤维素酶可以作为一种水产饲料添加剂。关键词：草鱼 浮萍 纤维素酶 生长性能 肠道菌群 消化酶1.前言由于全球日益增加的鱼粉需求量、价格以及全球供应波动，人们急于寻求一种其它的水产饲料蛋白质来源(NewandWijkstr?m, 2002)。人们将很多注意力放到了植物蛋白上，但是蛋白的利用率受到必需氨基酸和矿物质的限制以及某些抗营养因子，尤其是糖类物质(Vielma et al., 2003)。鱼类和哺乳动物比起来，它们不能有效地消化糖类物质作为一种能量来源纤维素是以葡萄糖残疾以β-1,4糖苷键连接而成的高聚物，是植物细胞壁的主要组成分，同时也是自然界最主要的糖类种类(Péreza and Samain, 2010)。它是由高度结晶与非结晶的微纤维矩阵镶嵌的复合形式构成，因此不易被水解酶水解。要消化纤维素而作为一种能量来源就需要一种酶能够裂解β-1,4糖苷键从而释放葡萄糖单位(Barret al., 1996)。纤维素分解细菌和真菌形成了一种能够将含有不可溶纤维质的基质向可溶性糖类转化的复杂体系(Tomme et al., 1995)。纤维素酶存在于多种无脊椎动物中(Martin, 1983;Zinkler and Gotze, 1987)。但是，几乎没有高等动物能够有效使用这种资源(Goodenough and Goodenough,1993)。关于水解酶的基础应用研究展示了它们在各行各业包括食品、动物饲料、酿造和酿酒，农业，生物质精炼，造纸，纺织，洗衣房的水解酶研究(Karmakarand Ray, 2011)。最几年，纤维素被用来作为一种提高畜禽生长性能和养分利用率的重要措施(Titi and Tabbaa, 2004)。然而鱼体内对于纤维素的适当的识别信息，表征，以及酶是稀缺的(Gao et al., 2006;Yu et al., 2001)。由于鱼粉越来越不足，纤维素已经成为评价植物营养价值的重要因素。草鱼(Ctenopharyngodon idella)，一种典型的草食性鱼类，以水草为食，能同时利用动物、植物因素，它的消化机制相当复杂(DeSilva, 2003; FAO, 2004)。 Das and Tripathi (1991)以不同天然食物和人工饲料饲喂草鱼研究了草鱼的消化酶。吞下浮萍后纤维素酶活性是最高的。在本实验中，纤维素酶被添加到饲料中以研究酶对草鱼生长性能和肠道菌群的影响。其结果可以为饲料添加剂提供非常有用的信息。作为一种典型的草食性鱼类，草鱼对于纤维素的应用信息也可以为其它鱼类提供一些参考。2.材料和方法2.1鱼和实验条件草鱼从广东淡水鱼场（中国广东花都区）获得。浮萍(L. minor Linn.）被收集起来倒掉多余水分然后保存在-200C。后面的营养成分分析用AOAC（2000）的标准程序。鱼养在1000L的池塘里，保持每天12小时光照，12小时黑暗，水温保持在23-250C，水保持过滤与流动。每天早上10点向鱼投喂切碎的浮萍直到饱食。每天清除粪便以及残饵。将鱼置于这样的条件下适应2周。表1是饲料的干物质营养成分近似组成。在适应完2周后，这些鱼（99.6±3.2g）被分成两组，实验组饲喂切碎的浮萍、小麦粉和纤维素酶的混合饲料，对照组饲喂浮萍和等量的小麦粉。每组分3个1000L水池，每个水池30尾鱼。如此饲喂2个月。酶是利用来自木霉属longibrachiatum(SIGMAC9748, USA)的真菌