最新2015届高考生物一轮详细复习 基 因 工 程(考点透析和典例跟踪详解和实验导航大题专训)课件 新人教版PPT.ppt

基 因 工 程 ;基因工程的工具;DNA聚合酶;(2)限制酶与DNA连接酶的关系：;2．载体。 (1)作用： ①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。 ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 (2)具备的条件： ①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。 ②有多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。 ③具有特殊的标记基因，以便进行筛选。;?特别提醒： 巧辨基因工程操作工具的8个易错点 (1)限制酶是一类酶，而不是一种酶。 (2)限制酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要适宜的理化条件，高温、强酸或强碱均易使之变性失活。 (3)在切割目的基因和载体时要求用同一种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。 (4)将一个基因从DNA分子上切割下来，需要切两处，同时产生4个黏性末端。;(5)不同DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性末端都相同，同一个DNA分子用不同的限制酶切割，产生的黏性末端一般不相同。 (6)限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便于进行检测。 (7)基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不同。基因工程中的载体是DNA分子，能将目的基因导入受体细胞内；膜载体是蛋白质，与细胞膜的通透性有关。 (8)基因工程中有3种工具，但工具酶只有2种。;;; 跟踪训练;A．DNA连接酶、限制性内切酶、解旋酶 B．限制性内切酶、解旋酶、DNA连接酶 C．解旋酶、限制性内切酶、DNA连接酶 D．限制性内切酶、DNA连接酶、解旋酶;基因工程的基本操作程序;(3)PCR技术与DNA复制的比较：;不 同点;;3．将目的基因导入受体细胞。;4.目的基因的检测与鉴定。;个体水平 检测;(2)基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象，第一步存在逆转录法获得DNA，第二步存在黏性末端连接现象，第四步检测存在分子水平杂交方法。 (3)原核生物作为受体细胞的优点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少。 (4)一般情况下，用同一种限制酶切割质粒和含有目的基因的片段，但有时可用两种限制酶分别切割质粒和目的基因，这样可避免质粒和质粒之间、目的基因和目的基因之间的连接。;(5)目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表???的过程，称为转化。转化的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。 (6)不熟悉标记基因的种类和作用：标记基因的作用——筛选、检测目的基因是否导入受体细胞，常见的有抗生素抗性基因、发光基因(表达产物为带颜色的物质)等。;(7)对受体细胞模糊不清：受体细胞常用植物受精卵或体细胞(经组织培养)、动物受精卵(一般不用体细胞)、微生物(大肠杆菌、酵母菌)等。要合成糖蛋白、有生物活性的胰岛素则必须用真核生物酵母菌(需内质网、高尔基体的加工、分泌)；一般不用支原体，原因是它营寄生生活；一定不能用哺乳动物成熟的红细胞，原因是它无细胞核，不能合成蛋白质。 (8)还应注意的问题有：①基因表达载体中，启动子(DNA片段)≠起始密码子(RNA)；终止子(DNA片段)≠终止密码子(RNA)。②基因表达载体的构建是最核心、最关键的一步，在体外进行。;【例2】　(2013·佛山、江门) BAK基因是近年来发现的一种促凋亡基因，癌细胞内的BAK基因表达异常。 (1)细胞凋亡是由________决定的细胞自动死亡的过程。由蝌蚪到成蛙，细胞凋亡致使蝌蚪尾部消失，这说明细胞凋亡对于多细胞生物体的正常________具有重要意义。 (2)癌变是在致癌因子的作用下，细胞内的________________发生了突变而导致的。在癌变细胞内，BAK基因的表达水平明显________。;(3)将体外扩增的BAK基因导入癌细胞诱导细胞凋亡，有望成为癌症治疗的新途径。用实验验证导入的BAK基因在胃癌细胞中大量表达所起的作用，结果如下图。据图完善和分析该实验。;①用________处理胃癌细胞使之分散成单个细胞，分为A、B、C三组。 ②A组细胞________________，B组细胞导入空载体，C组细胞______________。 ③在相同适宜条件下培养5天，统计各组活细胞数，并从分子水平上比较________的含量。;解析：(1)细胞凋亡是基因决定的细胞自动结束生命的过程，细胞凋亡对于多细胞生物体的正常发育具有重要意义;(2)人和动物体内与癌症有关的基因分为两类：原癌基因和抑癌基因，环境中的致癌因子可能导致这两种基因发生突变，导致正常的细胞生长和分裂失控变成癌细胞；癌细胞在适宜的条件下，能够无限增殖，不会自动凋亡，具有不死性，BAK基因是一种促凋亡基因，癌细胞内的BAK基因表达异常，所以在癌变细胞内，BAK基因的表达水平明显降低。(3)动物细胞培养时需要用到胰蛋白酶或者胶原蛋白酶来分散细胞，根据题意A、B、C组