植物组织石蜡切片的制作PPT.ppt

一、实验目的 掌握石蜡切片制作的基本过程及其注意事项。;石蜡制片的基本步骤 1.取材 2.固定、保存 3.脱水 4.透明 5.浸蜡与包埋 6.切片 7.粘片与烤片 8.脱蜡与复水 9.染色 10.切片脱水、透明和封固;1.取材 1.1 材料来源及部位： 与观察目的有关 ①种类 ②部位 ③发育阶段 ④观察横切面还是纵切面？ 1.2 取材原则： 动作：快，轻，用力均匀 体积合适（5-10mm为宜） 刀要锋利; 最常用的固定液为FAA。固定时间不受限制，短则 数小时，长可延至数月或数年。 配方： 50％或70％酒精 90毫升 冰醋酸 5毫升 福尔马林 5毫升 柔软材料用50％酒精，坚硬材料用70％酒精配制。;卡诺氏(Carnoy’s)固定液：有极强的渗透力 固定根尖和花药只需40-60分钟，时间太长不好(不能超一天)。 固定后用95％酒精冲洗，在组织不能立即处理时，需转入70％酒精中保存。配法有两种： ;组织固定后的处理;3. 脱水;要求及注意事项;4.透明;5.浸蜡与包埋;石蜡熔点： 45-50℃ 软蜡 55-60℃ 硬蜡 材料较硬的，用熔点较高的石蜡包埋； 切片较薄时（在8微米以下），用熔点较高的石蜡包埋； 夏季采用熔点较高的石蜡（56,58）,冬季宜选用熔点较低的石蜡（52,54）。 ;石蜡的处理： 新蜡应溶一次，增加密度。 并用滤纸过滤去除杂质。 加5%～10%的蜂蜡(工蜂腹部下面四对蜡腺分泌物质 ),增加石蜡的韧性。 反复溶的旧蜡包埋效果更好。;6. 切片;;切片刀的锐利与否、蜡块硬度适当都直接影响切片质量，可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。 通常切片厚度为8～12微米，切出一片接一片的蜡带，用毛笔轻托轻放在纸上。;7. 粘片与烤片;常用的粘片剂为郝伯特(Haupt) 粘贴剂： 甲液：明胶 1克 蒸馏水 100毫升 甘油 15毫升 苯酚 2克 乙液：甲醛 4毫升 蒸馏水 100毫升;8. 脱蜡及复水;顺序：二甲苯→1/2 二甲苯+1/2纯酒精→100%酒精→95％酒精→85％酒精→70％酒精→50％酒精→30％酒精→水→染色 以上各级约需5～10分钟。;9. 染色;;10. 切片脱水、透明和封固;将载玻片从二甲苯中取出，务必使有材???的一面朝上。 迅速在材料上加适量封固剂（不能使二甲苯干很久后才封片），盖上干净的盖玻片。 切片放入42℃温箱中干燥过夜。 镜检，将合格的切片贴上标签。